專利名稱：吲哚衍生物和其在治療骨質(zhì)疏松中的應(yīng)用以及其它應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一些新化合物，制備所述化合物的方法，含有所述化合物的藥物組合物，以及所述化合物和組合物在醫(yī)藥中的應(yīng)用。
已知與骨質(zhì)損失有關(guān)的疾病是由破骨細(xì)胞的過度活動引起的。還已知通常與巴菲羅美辛(bafilomycin)有關(guān)的一些化合物可用于治療這樣的疾病。例如，國際申請出版物WO 91/06296(AktiebolagetAstra)公開了一些可用于治療骨疾病的巴菲羅美辛大環(huán)內(nèi)酯化合物。
然而，巴菲羅美辛衍生物在人體中對破骨細(xì)胞沒有選擇性。因此，使用這些化合物會由于不加選擇地阻斷了其它必需的v-ATP酶而帶來一些無法接受的毒性作用。實(shí)際上，迄今為止已知沒有任何治療對人破骨細(xì)胞有選擇性。
為了在人中成功地治療與骨質(zhì)損失有關(guān)的疾病而進(jìn)行的研究非常復(fù)雜，這是因?yàn)檫x擇性地抑制破骨細(xì)胞的治療靶的性質(zhì)是有爭議的。因此Baron等人(國際申請出版物WO 93/01280)指出，把特異性空泡ATP酶(v-ATP酶)確定為破骨細(xì)胞中潛在的治療目標(biāo)。然而，Baron的研究是在雞中進(jìn)行的，而Hall等人(Bone and Mineral 27，159-166，(1994))在涉及哺乳動物的研究中推斷出下述結(jié)論與鳥類動物的破骨細(xì)胞v-ATP酶相反，哺乳動物破骨細(xì)胞v-ATP酶在藥理學(xué)上與其它細(xì)胞中的v-ATP酶類似，因此其不太可能是良好的治療靶。
現(xiàn)在已驚奇地發(fā)現(xiàn)，特定的吲哚化合物對哺乳動物破骨細(xì)胞有選擇性，其選擇性地抑制破骨細(xì)胞的骨吸收活動。因此認(rèn)為這些化合物可特別用于治療和/或預(yù)防與骨質(zhì)損失有關(guān)的疾病，例如骨質(zhì)疏松和相關(guān)的骨質(zhì)稀少疾病、佩吉特氏疾病、甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)和相關(guān)疾病。這些化合物還被認(rèn)為具有抗腫瘤活性、抗病毒活性(例如抗塞姆利基森林(Semliki Forest)病毒、水皰性口炎(VesicularStomatitis)病毒、新城病(Newcastle Disease)病毒、流感(Influenza)A和B病毒、HIV病毒)、抗?jié)兓钚?例如這些化合物可用于治療慢性胃炎和由幽門螺桿菌引起的消化潰瘍)、免疫抑制活性、抗異常脂血活性、抗動脈粥樣硬化活性，并可用于治療AIDS和阿爾茨海默氏病。此外，這些化合物還被認(rèn)為可用于抑制血管生成，即在多種類型病癥(血管生成性疾病)例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤中發(fā)現(xiàn)的新血管的形成。
因此，本發(fā)明提供了式(I)化合物 或其鹽、或其溶劑化物，其中R1和R2分別獨(dú)立地代表C1-6烷氧基或鹵素；R3和R4分別獨(dú)立地代表氫、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷氧基、羥基、羧基C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、二羥基C1-6烷氧基、一-和二-(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或氨基C1-6烷氧基，且R5代表-NRsRt，其中Rs和Rt分別獨(dú)立地代表氫、未取代或取代的C1-6烷基、或未取代或取代的雜環(huán)基。
適當(dāng)?shù)兀琑1和R2分別獨(dú)立地代表甲氧基或氯。
R1或R2的合適取代位置是4、5、6或7位。
有利地，R1或R2在5或6位。
優(yōu)選地，R1是5-氯，且R2是6-氯。
適當(dāng)?shù)兀琑3是羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、芐氧基、羧基乙氧基、羥基乙氧基、二羥基丙氧基、二甲基氨基乙氧基或氨基丙氧基。
適當(dāng)?shù)?，R3位于-COR5的鄰位或間位。
適當(dāng)?shù)?，R4是氫或甲氧基。
適當(dāng)?shù)?，R4位于-COR5的間位。
適當(dāng)?shù)?，Rs或Rt代表未取代或取代的C1-6烷基、或未取代或取代的雜環(huán)基。
當(dāng)Rs或Rt代表未取代或取代的C1-6烷基時(shí)，合適的C1-6烷基是乙基、丙基和丁基。
當(dāng)Rs或Rt代表取代的烷基時(shí)，有利的基團(tuán)是3-[4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]丙基和3-[4-(2-嘧啶基)哌嗪-1-基]丙基。
適當(dāng)?shù)兀琑s或Rt代表未取代或取代的哌啶基。
有利地，Rs或Rt代表未取代或取代的4-哌啶基。
當(dāng)Rs或Rt代表取代的哌啶基時(shí)，合適的取代基包括C1-6烷基、稠合的C3-8環(huán)烷基、芳基C1-6烷基、羥基C1-6烷基、多羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基C1-6烷基、羧基C1-6烷基、和氨基C1-6烷基。
哌啶基的有利取代基是C1-6烷基，尤其是甲基。
當(dāng)Rs或Rt代表取代的哌啶基時(shí)，取代基優(yōu)選連接在氮原子的一個(gè)或兩個(gè)α-碳上。
取代的哌啶基的實(shí)例是1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基和2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基。
Rt有利地為氫。
有一小組化合物完全落在式(I)范圍內(nèi)，這小組化合物是式(I′)化合物 其中R1、R2、R3、R4、和R5如式(I)中所定義，條件是，式(I′)化合物不包括4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-(1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-2-甲氧基-N-(1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；
4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-(3-二乙基氨基丙基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-2-甲氧基-N-(3-二乙基氨基丙基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-[3-[4-(3-氯苯基)哌嗪基]丙基]苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-2-甲氧基-N-[3-[4-(3-氯苯基)哌嗪基]丙基]苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-N-甲基苯甲酰胺；或4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-2-甲氧基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-N-甲基苯甲酰胺。
式(I’)化合物是新的。因此，本發(fā)明提供了式(I’)化合物或其鹽或其溶劑化物。
有一小組化合物完全落在式(I)范圍內(nèi)，這小組化合物是式(IA)化合物 其中R1、R2、R3、R4、和R5如式(I)中所定義，Rs是3-[4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]丙基或3-[4-(2-嘧啶基)哌嗪-1-基]丙基，且Rt是氫。式(IA)化合物是新的。
因此，本發(fā)明提供了式(IA)化合物或其鹽或其溶劑化物。
有一小組化合物完全落在式(I)范圍內(nèi)，這小組化合物是式(IB)化合物 其中R1、R2、R3、R4、和R5如式(I)中所定義，Rs是3-吡啶基或3-(6-甲氧基)吡啶基，且Rt是氫。式(IB)化合物是新的。
因此，本發(fā)明提供了式(IB)化合物或其鹽或其溶劑化物。
有一小組化合物完全落在式(I)范圍內(nèi)，這小組化合物是式(IC)化合物 其中R2、R4、和R5如式(I)中所定義，Rs是2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基，Rt是氫，R3是3-乙氧基，且R1是5-氯或5-甲氧基。式(IC)化合物是新的。
因此，本發(fā)明提供了式(IC)化合物或其鹽或其溶劑化物。
有一小組化合物完全落在式(I)范圍內(nèi)，這小組化合物是式(ID)化合物 其中R1、R2、R4、和R5如式(I)中所定義，Rs是2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基，Rt是氫，R3是2-甲氧基、3-甲氧基、3-乙氧基、3-丙氧基、3-芐氧基、3-(2-羧基乙氧基)、3-(2-羥基乙氧基)、3-(2，3-二羥基丙氧基)、3-(2-二甲基氨基乙氧基)或3-(3-氨基丙氧基)和3-羥基，且R4是5-甲氧基或氫。式(ID)化合物是新的。
因此，本發(fā)明提供了式(ID)化合物或其鹽或其溶劑化物。
有一小組化合物完全落在式(I)范圍內(nèi)，這小組化合物是式(IE)化合物 其中R1、R2、R4、和R5如式(I)中所定義，Rs是1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基，Rt是氫，且R3是2-甲氧基或3-乙氧基，且R4是5-甲氧基或氫。式(IE)化合物是新的。
因此，本發(fā)明提供了式(IE)化合物或其鹽或其溶劑化物。
有一小組化合物完全落在式(I)范圍內(nèi)，這小組化合物是式(IF)化合物 其中R1、R2、R3、R4、和R5如式(I)中所定義，Rs是1-芐基哌啶-4-基、1-(4-乙氧基羰基)丁基哌啶-4-基、1-(4-羥基羰基)丁基哌啶-4-基，且Rt是氫。式(IF)化合物是新的。
因此，本發(fā)明提供了式(IF)化合物或其鹽或其溶劑化物。
本文所用術(shù)語“烷基”包括具有1-12個(gè)、適當(dāng)?shù)?-6個(gè)、優(yōu)選1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基和戊基，并且還包括當(dāng)形成部分其它基團(tuán)例如烷氧基或鏈烷?；鶗r(shí)的烷基。
任何烷基上的適當(dāng)取代基包括雜環(huán)基，例如哌嗪基。
本文所用術(shù)語“芳基”包括苯基和萘基，尤其是苯基。
對于任何芳基，其合適的任選取代基包括最高達(dá)5個(gè)取代基。適當(dāng)?shù)刈罡哌_(dá)3個(gè)取代基，所述取代基選自烷基、烷氧基、烷硫基、羥基、鹵素、芳基、雜環(huán)基、三氟甲基、烷基羰基、氰基、硝基、或基團(tuán)-NRuRv，其中Ru和Rv各自獨(dú)立地代表氫、烷基或烷基羰基。
合適的芳基烷基包括苯基乙基和芐基，尤其是芐基。取代的芳烷基優(yōu)選在芳基部分上被取代。
本文所用術(shù)語“雜環(huán)”和“雜環(huán)基”包括飽和或不飽和或稠合環(huán)雜環(huán)基，每個(gè)環(huán)具有4-11個(gè)、尤其是5-8個(gè)、優(yōu)選5、6或7個(gè)環(huán)原子，其中環(huán)原子包括1、2或3個(gè)選自O(shè)、S、或N的雜原子。這樣的基團(tuán)的實(shí)例包括哌啶基、吡啶基、哌嗪基、和嘧啶基。
對于任何雜環(huán)基，其合適的任選取代基包括上文描述芳基的取代基時(shí)所提及的取代基。
本文所用術(shù)語“鹵素原子”或“鹵素”包括氟、氯、溴和碘，適當(dāng)?shù)貫榉吐?，?yōu)選為氯。
本文所用的“?；卑ㄍ榛驶?。
一些式(I)化合物可包含手性原子和/或重鍵，因此可以作為立體異構(gòu)體存在。本發(fā)明涉及所有立體異構(gòu)形式的式(I)化合物，包括幾何異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、對映異構(gòu)體及其混合物，包括外消旋體。
可通過常規(guī)方法分離或拆分立體異構(gòu)體，或者可通過常規(guī)立體有擇或不對稱合成來制得任何給定的異構(gòu)體。
合適的鹽是可藥用鹽。
合適的可藥用鹽包括酸加成鹽和羧基的鹽。
合適的可藥用酸加成鹽包括與無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的鹽，無機(jī)酸有例如鹽酸、氫溴酸、正磷酸或硫酸，有機(jī)酸有例如甲磺酸、甲苯磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸、蘋果酸、琥珀酸、水楊酸、馬來酸、甘油磷酸或乙酰基水楊酸。
合適的羧基的可藥用鹽包括金屬鹽例如鋁鹽，堿金屬鹽例如鈉鹽或鉀鹽和鋰鹽，堿土金屬鹽例如鈣鹽或鎂鹽，和銨鹽或取代的銨鹽，例如與下述堿形成的銨鹽C1-6烷基胺如三乙胺，羥基C1-6烷基胺例如2-羥基乙基胺、二(2-羥基乙基)胺或三(2-羥基乙基)胺，環(huán)烷基胺例如二環(huán)己基胺，或普魯卡因、1，4-二芐基哌啶、N-芐基-6-苯乙基胺、脫氫樅胺、N，N’-雙脫氫樅胺、葡糖胺、N-甲基葡糖胺，或吡啶型堿例如吡啶、可力丁、或喹啉。
式(I)化合物合適的溶劑化物是可藥用溶劑化物例如水合物。
式(I)化合物的非可藥用的鹽和/或溶劑化物可用作制備式(I)化合物的可藥用鹽和/或溶劑化物或式(I)化合物自身的中間體，并構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。
式(I)化合物可通過用合適的胺將適當(dāng)羧酸酰胺化來制得。因此，本發(fā)明還提供了制備式(I)化合物或其鹽或溶劑化物的方法，所述方法包括用式(III)化合物HNRs’Rt’(III)其中Rs’和Rt’分別代表如式(I)中所定義的Rs和Rt或其保護(hù)形式，將式(II)化合物酰胺化 其中R1’、R2’、R3’、和R4’分別代表如式(I)中所定義的R1、R2、R3、和R4或其保護(hù)形式，然后按照需要進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)下述步驟(i)將一種式(I)化合物轉(zhuǎn)化成另一種式(I)化合物；(ii)除去任何保護(hù)基；(iii)制備所形成的化合物的鹽或溶劑化物。
合適的酰胺化方法包括用式(III)化合物處理式(II)化合物。
式(II)與(III)化合物之間的反應(yīng)可在常規(guī)酰胺化條件下，例如在非質(zhì)子傳遞溶劑如二甲基甲酰胺、乙腈和四氫呋喃中，在能提供形成所需產(chǎn)物的適當(dāng)速度的任意溫度下，方便起見在室溫下進(jìn)行；該酰胺化反應(yīng)優(yōu)選在肽偶聯(lián)劑例如1-羥基苯并三唑(HOBT)、和/或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(WSC)存在下進(jìn)行。
式(II)化合物可通過將式(IV)化合物環(huán)化而制得 其中R1’R2’、R3’、和R4’如式(II)中所定義，且Rp代表保護(hù)的羧基或可轉(zhuǎn)化成羧基的基團(tuán)，
然后按照需要將基團(tuán)Rp轉(zhuǎn)化成羧基。
適當(dāng)?shù)?，該環(huán)化反應(yīng)在還原環(huán)化條件下，例如使用鐵粉/乙酸混合物或堿金屬亞硫酸氫鹽例如亞硫酸氫鈉，在任何適當(dāng)溶劑例如四氫呋喃、乙醇、甲醇、或水或其混合物中，在能提供形成所需產(chǎn)物的適當(dāng)速度的任意溫度下，例如在高溫下，方便起見在溶劑的回流溫度下進(jìn)行。
當(dāng)Rp是保護(hù)的羧基時(shí)，合適的基團(tuán)包括可通過常規(guī)水解方法例如通過使用氫氧化鉀乙醇溶液的堿性水解除去的低級烷氧基羰基，例如甲氧基羰基或乙氧基羰基。
當(dāng)Rp是可轉(zhuǎn)化成羧基的基團(tuán)時(shí)，合適的基團(tuán)包括氰基?？墒褂贸Ｒ?guī)方法將這樣的基團(tuán)轉(zhuǎn)化成羧基，例如當(dāng)Rp是氰基時(shí)，可使用常規(guī)方法通過水解，例如通過使用氫氧化鉀乙醇溶液于回流狀態(tài)下進(jìn)行堿性水解來將其轉(zhuǎn)化成羧基。
Rp的優(yōu)選值(value)是氰基。
式(IV)化合物是通過將式(V)化合物 其中R1’和R2’如式(II)中所定義與式(VI)化合物反應(yīng)而制得 其中R3’、R4’、和Rp如式(IV)中所定義，且L1代表離去基團(tuán)，例如鹵素如氯。
式(V)與(VI)化合物之間的反應(yīng)可在惰性烴類溶劑例如環(huán)己烷中，在能提供形成所需產(chǎn)物的適當(dāng)速度的任意溫度下，優(yōu)選在高溫下，例如在溶劑的回流溫度下，在堿、優(yōu)選叔胺例如三乙胺存在下進(jìn)行。
式(V)與(VI)化合物之間的反應(yīng)是經(jīng)由通常不用分離、并且在原位加熱時(shí)能提供所需式(IV)化合物的中間體。在另一個(gè)方面，將該中間體分離出來，由此提供了制備式(IV)化合物的另一方法，其中將式(VII)化合物加熱， 其中R1’、R2’、R3’、和R4’如式(II)中所定義，且Rp如式(IV)中所定義，以獲得如上所定義的式(IV)化合物。
將化合物(VII)轉(zhuǎn)化成式(IV)化合物的反應(yīng)可在極性溶劑混合物例如二氧雜環(huán)己烷與水的混合物中，通常在所用溶劑混合物的回流溫度下，在類似于J.Het.Chem.11，219-221，(1974)中描述的條件下方便地進(jìn)行。
式(V)化合物是已知化合物，或者可用類似于制備已知化合物的方法，例如Meervein等人在Ann.Chem.641，1(1961)和Org.Synth.Collective VII，34-41中公開的方法制得。
式(VI)化合物是已知的，可商購獲得，或者可用類似于制備已知化合物的方法，例如在J.March，Advanced Organic Chemistry，3rdEdition(1985)，Wiley Interscience中描述的方法制得。
式(III)化合物是已知的，或者可用類似于制備已知化合物的方法，例如在J.March，Advanced Organic Chemistry，3rd Edition(1985)，Wiley Interscience中描述的方法制得。
通式HNRs’Rt’胺可通過本領(lǐng)域已知的制備胺的方法，例如在Houben-Weil，Methoden der Organischen Chemie，Vol.XI/1(1957)和Vol.E16d/2(1992)，Georg Thieme Verlag，Stuttgart中描述的方法制得。
或者，式(II)化合物可通過將式(VIII)化合物環(huán)化而制得 其中R1’、R2’、R3’、和R4’如式(II)中所定義，且Rp’代表保護(hù)的羧基或可轉(zhuǎn)化成羧基的基團(tuán)，然后按照需要將基團(tuán)Rp’轉(zhuǎn)化成羧基。
適當(dāng)?shù)?，使用Suzuki反應(yīng)條件，使用鈀催化劑例如氯化二(乙腈)鈀(II)，在有機(jī)堿例如三乙胺存在下，在其任意適當(dāng)溶劑例如四氫呋喃中，在能提供形成所需產(chǎn)物的適當(dāng)速度的任意溫度下，優(yōu)選在高溫下，例如在所用溶劑的回流溫度下進(jìn)行該環(huán)化反應(yīng)。
當(dāng)Rp’是保護(hù)的羧基時(shí)，合適的保護(hù)基包括可通過常規(guī)水解方法例如通過使用氫氧化鉀乙醇溶液的堿性水解除去的烷氧羰基例如芐氧基羰基。
Rp’的優(yōu)選值是芐氧基羰基。
式(VIII)化合物可通過將式(IX)化合物 其中R1’和R2’如式(II)中所定義，與式(X)化合物反應(yīng)而制得 其中R3’、R4’如式(II)中所定義，且Rp’如式(VIII)中所定義。
式(IX)與(X)化合物之間的反應(yīng)可在非質(zhì)子傳遞溶劑例如四氫呋喃中，在能提供形成所需產(chǎn)物的適當(dāng)速度的任意溫度下，優(yōu)選在0-25℃，在鈀催化劑，優(yōu)選氯化二(三苯基膦)鈀(II)，和銅鹽、優(yōu)選碘化亞銅(I)存在下進(jìn)行。
式(IX)化合物是已知化合物，或者可用類似于制備已知化合物的方法，例如Yu M.S.等在Tetrahedron Letters，39，9347，(1998)中公開的方法制得。
式(X)化合物可通過將式(XI)化合物 其中R3’、R4’如式(II)中所定義，且Rp’如式(VIII)中所定義與式(XII)化合物反應(yīng)而制得 式(XI)與(XII)化合物之間的反應(yīng)可在非質(zhì)子傳遞溶劑例如四氫呋喃中，在能提供形成所需產(chǎn)物的適當(dāng)速度的任意溫度下，優(yōu)選在0-25℃，在鈀催化劑，優(yōu)選氯化二(三苯基膦)鈀(II)，和銅鹽、優(yōu)選碘化亞銅(I)存在下，以及在堿，優(yōu)選叔胺例如三乙胺存在下進(jìn)行。
式(XI)與(XII)化合物之間的反應(yīng)經(jīng)由中間體進(jìn)行，如果需要的話該中間體可不用分離，并且可通過用氟化四正丁基銨除去起保護(hù)作用的甲硅烷基來由該中間體生成所需的式(X)化合物。在另一個(gè)方面，分離出該中間體，由此提供了制備式(X)化合物的另一方法，其中將式(XIII)化合物加熱， 其中R3’、和R4’如式(II)中所定義，且Rp’如式(VIII)中所定義，以獲得如上所定義的式(X)化合物。
式(XI)化合物是已知化合物，或者可用類似于制備已知化合物的方法，例如Buehler，C.A.等人在J.Am.Chem.Soc.68，574(1946)中公開的方法制得。
式(XII)化合物是已知的，可商購獲得，或者可用類似于制備已知化合物的方法，例如在J.March，Advanced Organic Chemistry，3rd Edition(1985)，Wiley Interscience中描述的方法制得。
可依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)操作將式(I)化合物或其鹽或其溶劑化物從上述方法中分離出來。
可用適當(dāng)常規(guī)方法制備式(I)化合物的鹽和/或溶劑化物。
如果需要的話，可通過常規(guī)手段將本發(fā)明化合物的異構(gòu)體混合物分離成單一立體異構(gòu)體。例如，可通過使用光學(xué)活性酸作為拆分劑來拆分對映異構(gòu)體?？捎米鞑鸱謩┑暮线m的光學(xué)活性酸描述在“Topicsin Stereochemistry”，Vol.6，Wiley Interscience，1971，Allinger，N.L.和Eliel，W.L.Eds中。
或者，本發(fā)明化合物的任何對映異構(gòu)體可通過使用已知構(gòu)型的光學(xué)純原料的立體有擇合成來獲得。
化合物的絕對構(gòu)型可通過常規(guī)方法例如X-射線結(jié)晶學(xué)技術(shù)來確定。
任何反應(yīng)性基團(tuán)的保護(hù)可在上述方法的任何適當(dāng)階段進(jìn)行。合適的保護(hù)基包括本領(lǐng)域內(nèi)常用于保護(hù)特定基團(tuán)的保護(hù)基?？捎煤线m的常規(guī)方法制備和除去保護(hù)基，例如，可通過用適當(dāng)甲硅烷化劑例如二叔丁基甲硅烷基二(三氟甲磺酸酯)處理來將羥基，包括二醇作為甲硅烷化衍生物保護(hù)起來。然后可使用常規(guī)方法，例如用氟化氫、優(yōu)選吡啶復(fù)合物形式的氟化氫，任選在氧化鋁存在下處理，或通過用乙酰氯在甲醇中處理來除去甲硅烷基?；蛘撸墒褂闷S氧基來保護(hù)酚基，可通過使用諸如氯化鈀(II)或10％鈀/炭這樣的催化劑的催化氫解來除去芐氧基。
可使用任何常規(guī)保護(hù)基將氨基保護(hù)，例如可通過用二碳酸二叔丁酯處理氨基來形成氨基甲酸叔丁酯，可通過使用例如氯化氫的含水乙醇溶液或三氟乙酸的二氯甲烷溶液在酸性條件下水解來再生出氨基。氨基可以作為芐基衍生物(由適當(dāng)胺和芐基鹵在堿性條件下制備的)保護(hù)，可通過使用例如鈀/炭催化劑的催化氫解來除去芐基。
可使用任何常用基團(tuán)例如下述基團(tuán)將吲哚的NH基團(tuán)等保護(hù)苯磺?；⒓谆酋；?、甲苯磺?；⒓柞；⒁阴；?所有這些保護(hù)基都可通過用堿性試劑處理來除去)、芐基(可在液氨中用鈉或在甲苯中用AlCl3來除去)、烯丙基(可通過在酸性條件下用氯化銠(III)處理來除去)、芐氧基羰基(可通過催化或堿性處理來除去)、三氟乙?；?可通過堿性或酸性處理來除去)、叔丁基二甲基甲硅烷基(可通過用氟化四丁基銨處理來除去)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(SEM)(可通過在乙二胺存在下用氟化四丁基銨處理來除去)、甲氧基甲基(MOM)或甲氧基乙基(MEM)(可通過弱酸性處理來除去)。
羧基可作為烷基酯例如甲酯保護(hù)起來，可用常規(guī)方法制備和除去這樣的酯，將甲氧羰基轉(zhuǎn)化成羧基的一種常用方法是使用氫氧化鋰水溶液。
離去基團(tuán)是在反應(yīng)條件下能從原料上裂解下來、以由此在特定位點(diǎn)上進(jìn)行反應(yīng)的基團(tuán)。除非另有說明，否則這樣的離去基團(tuán)的適當(dāng)實(shí)例是鹵素、甲磺酰氧基、對硝基苯磺酰氧基和甲苯磺酰氧基。
可按照需要通過本領(lǐng)域常規(guī)方法制備本文所述化合物的鹽、酯和溶劑化物。例如，酸加成鹽可通過用合適的酸處理式(I)化合物來制得。
羧酸酯可通過常規(guī)酯化方法制得，例如，烷基酯可通過用用適當(dāng)鏈烷醇處理所需羧酸、通常在酸性條件下處理來制得。
酰胺可用常規(guī)酰胺化方法制得，例如，式CONRs’Rt’酰胺可通過用其中Rs’和Rt’如上所定義的式HNRs’Rt’胺處理相關(guān)羧酸來制得?；蛘?，可按照在Tetrahedron Lett.48，4171-4173，(1977)中描述的方法，任選在三甲基鋁存在下，用如上所定義的式HNRs’Rt’胺處理酸的C1-6烷基酯例如甲酯以生產(chǎn)相應(yīng)的酰胺。
如上所述的本發(fā)明化合物具有有用的治療特性。
特別值得關(guān)注的是與絕經(jīng)期間和絕經(jīng)后狀態(tài)有關(guān)的骨質(zhì)疏松。本發(fā)明還包括治療和預(yù)防佩吉特氏病、與骨新生物有關(guān)的高鈣血、以及如下所述依據(jù)其病因?qū)W分類的所有類型的骨質(zhì)疏松疾病。原發(fā)性骨質(zhì)疏松退化性I型或經(jīng)絕后II型或老年青少年年輕人中的特發(fā)性繼發(fā)性骨質(zhì)疏松內(nèi)分泌異常甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)性腺機(jī)能減退卵巢發(fā)育不全或Turner′s綜合征腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)或Cushing′s綜合征甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)骨髓異常多發(fā)性骨髓瘤和相關(guān)病癥全身性肥大細(xì)胞增多癥轉(zhuǎn)移性癌Gaucher′s病結(jié)締組織異常骨生成不完全高胱氨酸尿埃-當(dāng)二氏綜合征馬方氏綜合征門克斯綜合征各種病因固定術(shù)或失重祖德克氏萎縮慢性堵塞性肺病慢性酒精中毒長期肝素施用長期服用抗驚厥藥物此外，本發(fā)明包括治療腫瘤，尤其是腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病，病毒性病癥(例如涉及塞姆利基森林病毒、水皰性口炎病毒、新城病病毒、流感A和B病毒、HIV病毒的病癥)，潰瘍(例如慢性胃炎和由幽門螺桿菌引起的消化潰瘍)，和在自身免疫性疾病和移植中用作免疫抑制劑，用作抗異常脂血?jiǎng)?，和用于治療?或預(yù)防高膽固醇血以及動脈粥樣硬化疾病，并可用于治療AIDS和阿爾茨海默氏病。這些化合物還被認(rèn)為可用于治療血管生成性疾病，即依賴血管生成的病癥，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤。
因此，本發(fā)明提供了治療和/或預(yù)防哺乳動物中與破骨細(xì)胞過度活動有關(guān)的疾病的方法，包括施用有效無毒量的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
另一方面，本發(fā)明提供了在人或非人哺乳動物中治療骨質(zhì)疏松以及相關(guān)的骨質(zhì)稀少疾病的方法，包括給需要治療的人或非人哺乳動物施用有效無毒量的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
另一方面，本發(fā)明還提供了在人或非人哺乳動物中治療腫瘤，尤其是腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病，病毒性病癥(例如涉及塞姆利基森林病毒、水皰性口炎病毒、新城病病毒、流感A和B病毒、HIV病毒的病癥)，潰瘍(例如慢性胃炎和由幽門螺桿菌引起的消化潰瘍)，自身免疫性疾病和移植，治療和/或預(yù)防高膽固醇血以及動脈粥樣硬化疾病，AIDS和阿爾茨海默氏病，血管生成性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤的方法，包括給需要治療的人或非人哺乳動物施用有效無毒量的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
另一方面，本發(fā)明提供了用作活性治療物質(zhì)的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
另一方面，本發(fā)明提供了可用于治療或預(yù)防哺乳動物中與破骨細(xì)胞過度活動有關(guān)的疾病的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
另一方面，本發(fā)明提供了可用于治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松以及相關(guān)骨質(zhì)稀少疾病的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
另一方面，本發(fā)明提供了具有下述用途的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物在人或非人哺乳動物中治療腫瘤，尤其是腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病，病毒性病癥(例如涉及塞姆利基森林病毒、水皰性口炎病毒、新城病病毒、流感A和B病毒、HIV病毒的病癥)，潰瘍(例如慢性胃炎和由幽門螺桿菌引起的消化潰瘍)，自身免疫性疾病和移植，治療和/或預(yù)防高膽固醇血以及動脈粥樣硬化疾病，AIDS和阿爾茨海默氏病，血管生成性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤。
可施用式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物本身，優(yōu)選施用作為還包含可藥用載體的藥物組合物。
因此，本發(fā)明還提供了藥物組合物，其中包含式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物與可藥用載體。
活性化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物一般是在單位劑型中施用。
能有效治療上述疾病的量取決于諸如活性化合物效力、所選的可藥用鹽或可藥用溶劑化物的特定性質(zhì)、所治療疾病的嚴(yán)重程度和哺乳動物體重這樣的因素。然而，單位劑量通常含有0.01-50mg、例如1-25mg本發(fā)明化合物。單位劑量通常每天施用1次或1次以上，例如每天施用1、2、3、4、5或6次，更通常每天施用1-3或2-4次，這樣對于70kg成人，總?cè)談┝客ǔ?.01-250mg、更通常1-100mg、例如5-70mg，即約0.0001-3.5mg/kg/天、更通常0.01～1.5mg/kg/天、例如0.05～0.7mg/kg/天。
在這樣的治療中，活性化合物可通過任何合適的途徑例如口服、非胃腸道或局部途徑施用。對于這樣的應(yīng)用，化合物通常以包含醫(yī)藥或獸藥載體、稀釋劑和/或賦形劑的藥物組合物形式施用，但是確切的組合物形式將取決于給藥方式。
組合物是通過混合制得，并適于口服、非胃腸道或局部給藥，并且可呈片劑、膠囊、口服液體制劑、粉劑、粒劑、錠劑、軟錠劑、可重新配制的粉劑、可注射和輸注的溶液或懸浮液、以及栓劑和透皮給藥裝置的形式?？煽诜o藥的組合物是優(yōu)選的，特別是成形的口服組合物，因?yàn)樗鼈兏阌谝话闶褂谩?br> 用于口服給藥的片劑和膠囊一般呈單位劑型的形式，并含有常規(guī)賦形劑例如粘合劑、填充劑、稀釋劑、制片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、矯味劑、和潤濕劑?？梢罁?jù)本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)給片劑包衣。
適用的填充劑包括纖維素、甘露醇、乳糖以及其它類似填充劑。
合適的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物例如羥乙酸淀粉鈉。合適的潤滑劑包括例如硬脂酸鎂。合適的可藥用潤濕劑包括十二烷基硫酸鈉。
這些固體口服組合物可通過常規(guī)混合、填充、制片等方法制得?？墒褂梅磸?fù)混合操作來將活性組分分布在采用大量填充劑的組合物中。這樣的操作當(dāng)然是本領(lǐng)域常規(guī)操作。
口服液體制劑可以呈例如水或油懸浮液、溶液、乳液、糖漿劑或酏劑的形式，并可以作為使用前用水或其它適當(dāng)載體重新配制的干燥產(chǎn)品使用。這樣的液體制劑可以含有常規(guī)添加劑，例如懸浮劑如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化可食用脂肪；乳化劑例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯、或阿拉伯膠；非水載體(可包括食用油)例如杏仁油、分餾的椰子油、油酯例如甘油酯、丙二醇或乙醇；防腐劑例如對羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，以及如果需要的話還包含常用矯味劑或著色劑。
為了非胃腸道給藥，制備含有本發(fā)明化合物和無菌載體的液體單位劑型。根據(jù)載體和濃度，可將化合物懸浮或溶解。非胃腸道給藥溶液一般是這樣制得的將化合物溶解在載體中、無菌過濾、然后填充到合適的瓶或安瓿中并密封。有利起見，還將輔助劑例如局麻劑、防腐劑和緩沖劑溶解在載體中。為了提高穩(wěn)定性，可將組合物填充到瓶中，然后冷凍干燥，并真空除去水分。
非胃腸道給藥懸浮液是以基本上相同方法制得的，除外的是將化合物懸浮而不是溶解，并且在懸浮在無菌載體中之前通過暴露于氧化乙烯來將化合物滅菌。有利起見，可向組合物中加入表面活性劑或潤濕劑以促進(jìn)活性化合物的均勻分布。
為了局部給藥，組合物可呈用于系統(tǒng)遞送活性化合物的透皮給藥用膏劑或貼劑的形式，并可以用常規(guī)方法制備，例如按照在標(biāo)準(zhǔn)教科書例如“Dermatological Formulations”-B.W.Barry(Drugs andthe Pharmaceutical Sciences Dekker)或Harrys Cosmeticology(Leonard Hill Books)中描述的方法。
因此，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物在制備用于治療和/或預(yù)防哺乳動物中與破骨細(xì)胞過度活動有關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物在制備用于治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松以及相關(guān)骨質(zhì)稀少疾病的藥物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物在制備具有下述作用的藥物中的應(yīng)用用于治療腫瘤，尤其是腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病，病毒性病癥(例如涉及塞姆利基森林病毒、水皰性口炎病毒、新城病病毒、流感A和B病毒、HIV病毒的病癥)，潰瘍(例如慢性胃炎和由幽門螺桿菌引起的消化潰瘍)，自身免疫性疾病和移植，用于治療和/或預(yù)防高膽固醇血以及動脈粥樣硬化疾病，AIDS和阿爾茨海默氏病，血管生成性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤。
當(dāng)依據(jù)本發(fā)明給藥時(shí)，預(yù)計(jì)本發(fā)明化合物沒有任何不可接受的毒性作用。按照通常慣例，組合物通常附有書面或印刷的關(guān)于在治療中使用的說明書。
下述描述、實(shí)施例和藥理方法是為了舉例說明本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。描述和實(shí)施例描述1反式-4，5-二氯-2-硝-β-二甲基氨基苯乙烯 將10.3g(50mmol)4，5-二氯-2-硝基甲苯(Helv.Chim.Acta1936，19，434-439)在11.9g(100mmol)N，N-二甲基甲酰胺縮二甲醇在DMF(25ml)內(nèi)的混合物中的溶液于100℃加熱16小時(shí)。將該深色反應(yīng)混合物真空濃縮，將殘余物用二氯甲烷稀釋，并用水洗滌2次。用硫酸鎂將該有機(jī)溶液干燥，然后真空濃縮，獲得了12.6g(48mmol，產(chǎn)率96.5％)本標(biāo)題化合物的粗產(chǎn)物，為暗紅色晶體。描述22-甲氧基-4-氰基苯甲酰氯 將2-甲氧基-4-氰基苯甲酸(Tetrahedron Letters，1986，27(49)，5997-6000)(1g，5.6mmol)溶解在二氯甲烷(20ml)中。迅速將草酰氯(1.5ml，8.2mmol)加到該溶液中，并加入一滴DMF。發(fā)生了劇烈反應(yīng)，并釋放出大量氣體產(chǎn)物。將該溶液攪拌1小時(shí)，然后靜置過夜。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑，獲得了1.1g黃白色固體(5.6mmol，產(chǎn)率99％)，不用進(jìn)一步純化直接使用。描述33-甲氧基-4-[2-[(4，5-二氯-2-硝基)苯基]-1-氧代-乙基]-芐腈
將如在描述3中制備的2-甲氧基-4-氰基苯甲酰氯(1.1g，5.6mmol)分批加到反式-4，5-二氯-2-硝基-β-二甲基氨基苯乙烯(1.47g，5.6mmol)與三乙胺(1.5ml，10mmol)在環(huán)己烷(20ml)內(nèi)的攪拌溶液中。然后將該溶液回流16小時(shí)。將該反應(yīng)冷卻，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去所有揮發(fā)性物質(zhì)。獲得了深色殘余物，然后將其溶解在二氯甲烷(40ml)中，并用10％碳酸鈉溶液(20ml)洗滌。然后用硫酸鈉將有機(jī)層干燥，過濾，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑。獲得了深棕到黑色粉末(2.42g)，將其溶解在盡可能少量乙酸乙酯中，并向該溶液中加入己烷以沉淀出淺棕色粉末(1.72g，mp＝167-170℃)，不用進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。
將該中間體粗產(chǎn)物(1.2g)溶解在1，4-二氧雜環(huán)己烷(20ml)中，并加入水(10ml)。將該溶液回流48小時(shí)，趁熱過濾，然后在冰浴中冷卻。獲得了黃到棕色晶體，用布氏漏斗過濾，獲得了0.60g(1.6mmol，產(chǎn)率30％)本標(biāo)題化合物，mp＝171-174℃。1H NMR(CDCl3)δ＝8.27(s，1H)；7.81(d，1H)；7.49(s，1H)；7.35(dd，1H)；7.28(d，1H)；4.61(s，2H)；4.00(s，3H).描述43-甲氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-芐腈 將3-甲氧基-4-[2-(4，5-二氯-2-硝基)苯基-1-氧代-乙基]-芐腈(0.4g，1.0mmol)溶解在EtOH(10ml)和AcOH(10ml)中。將該溶液輕微回流，并用1小時(shí)以少量多次的方式加入鐵粉(0.5g，9mmol)。將該溶液回流12小時(shí)，然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑。用THF將殘余物萃取數(shù)次。除去溶劑后，獲得了3-甲氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-芐腈粗產(chǎn)物(0.35g，1.0mmol，產(chǎn)率100％)，不用進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。mp＝241-244℃。1H NMR(DMSO-d6)δ＝11.60(s br，1H)；7.98(d，1H)；7.85(s，1H)；7.67(s，1H)；7.65(d，1H)；7.55(dd，1H)；7.14(s，1H)；4.00(s，3H).描述53-甲氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸 將3-甲氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-芐腈(0.35g，1.0mmol)懸浮在30％NaOH(20ml)和95％EtOH(20ml)中。然后將該混合物回流12小時(shí)，然后冷卻至室溫。使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將該懸浮液濃縮至約一半體積，然后用布氏漏斗過濾獲得了黃褐色到黃色粉末。將其在10％HCl中攪拌2小時(shí)。然后將該溶液過濾，獲得了0.256g(0.76mmol，產(chǎn)率69％)本標(biāo)題化合物的粗產(chǎn)物，通過色譜法純化，獲得了150mg純的本標(biāo)題化合物，mp＞270℃。1H NMR(DMSO-d6)δ＝11.60(寬s，1H)；7.92(d，1H)；7.83(s，1H)；7.66(m，3H)；7.10(s，1H)；4.02(s，3H).描述62-乙氧基-4-氨基苯甲酸 將2-乙氧基-4-乙酰氨基苯甲酸甲酯(50g，211mmol)在NaOH水溶液(15％W/W，200ml)中的懸浮液輕微回流16小時(shí)。將所得淺棕色溶液冷卻至室溫，然后在冰水浴中冷卻。加入濃鹽酸(37％w/w)直至該溶液的pH達(dá)到6。將從該溶液中沉淀出來的固體真空過濾，在50℃干燥，獲得了38.3g本標(biāo)題化合物(產(chǎn)率100％)。描述72-乙氧基-4-氰基苯甲酸 在裝配有密封機(jī)械攪拌器的1升反應(yīng)器中，將CuCN(12g，134mmol)懸浮在100ml蒸餾水中。在劇烈攪拌下加入NaCN(18.3g，373mmol)，并將內(nèi)溫維持在40℃以下，直至所有CuCN溶解在溶液中。將2-乙氧基-4-氨基苯甲酸(20g，110mmol)在水(200ml)中的懸浮液與濃鹽酸(33ml)攪拌，并在冰浴中冷卻。當(dāng)溫度達(dá)到5℃時(shí)，以把溫度維持在5℃以下的速度滴加NaNO2(9.7g，140mmol)在水(30ml)中的溶液。當(dāng)所有NaNO2加入完畢后，經(jīng)由冰冷卻的滴液漏斗將該溶液緩慢地加到含有NaCN/CuCN溶液的反應(yīng)器內(nèi)。該反應(yīng)劇烈地形成了氮?dú)狻＜尤霂椎涡链家钥刂婆菽?。繼續(xù)攪拌4小時(shí)。然后用乙酸乙酯(3×100ml)萃取所得懸浮液，用硫酸鎂將有機(jī)相干燥，并真空濃縮，獲得了15g本標(biāo)題化合物(產(chǎn)率71.1％)，為淺棕色粉末，mp＝170-172℃。描述83-乙氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸 按照描述1-5的方法，由在描述7中制得的2-乙氧基-4-氰基苯甲酸制得了本標(biāo)題化合物。按2-乙氧基-4-氰基苯甲酸計(jì)，以總共18％的產(chǎn)率制得了本標(biāo)題化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ＝11.63(s br，1H)；7.89(d，1H)；7.83(s，1H)；7.65(s，1H)；7.64(d，1H)；7.63(s，1H)；7.13(s br，1H)；4.27(q，2H)；1.48(t，3H).描述92，5-二甲氧基對苯二甲酸二甲酯 將2，5-二羥基對苯二甲酸(5g，25mmol)、K2CO3(10g，72mmol)和硫酸二甲酯(11ml，116mmol)在丙酮(100ml)中的懸浮液回流攪拌24小時(shí)。將該混合物趁熱過濾，將溶劑蒸發(fā)至大約初始體積的一半。冷卻后，沉淀出了白色針狀物，過濾并干燥，獲得了4.6g本標(biāo)題化合物(產(chǎn)率73％)，mp＝141-143℃。描述102，5-二甲氧基對苯二甲酸單甲酯 將如在描述9中制得的2，5-二甲氧基對苯二甲酸二甲酯(4g，15.7mmol)在KOH甲醇溶液(0.86g KOH在100ml MeOH中的溶液)中的懸浮液回流3小時(shí)。將該溶液冷卻，并真空除去溶劑。用稀鹽酸處理該殘余物，并過濾出固體。將該粗產(chǎn)物混合物通過柱色譜純化，用1∶1乙酸乙酯/己烷洗脫，獲得了1.72g本標(biāo)題化合物(產(chǎn)率44.7％)，mp＝123-124℃描述112，5-二甲氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸 按照描述1-5的方法，由如在描述10中制得的2，5-二甲氧基對苯二甲酸單甲酯制得了本標(biāo)題化合物。按2，5-二甲氧基對苯二甲酸單甲酯計(jì)，以46％的總產(chǎn)率制得了本標(biāo)題化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ＝11.38(s br，1H)；7.79(s，1H)；7.68(s，1H)；7.5 1(s，1H)；7.43(s，1H)；7.11(d，1H)；3.92(s，3H)；3.91(s，3H).描述124-溴-3-羥基苯甲酸 該酸是按照類似于Buehler等人(Buehler，C.A.，Harris，J.O.，Shacklett，C和Block，B.P.；J.Am.Chem.Soc.，68，574-577(1946))描述的方法制得的。在室溫、氬氣氛、攪拌下，用2小時(shí)向3-羥基苯甲酸(50.0g，0.362mol)在乙酸(495ml)內(nèi)的懸浮液中加入溴(57.97g，0.3627mol)在乙酸(192ml)中的溶液。期間內(nèi)溫從18.0上升至22.0℃。將該混合物攪拌21小時(shí)，然后真空濃縮，收集大約500ml餾出液。將所得濃縮溶液在4℃貯存2小時(shí)。過濾出所得白色固體，并用冷水(100ml)洗滌。將該固體溶解在最小體積的沸水(220ml)中，過濾并冷卻至室溫。通過過濾取出所得固體，用冷水洗滌，并在真空烘箱中于58℃干燥，獲得了本標(biāo)題化合物(12.50g，產(chǎn)率15.9％)，mp＝231-232℃，(lit mp 225-226℃)1。1H NMR(400.13 MHz，DMSO-d6)13.00(1H，bs，CO2H)，10.64(1H，bs，OH)，7.60(1H，d，H-5，J5-68.0Hz)，7.52(1H，d，H-2，J2-62.0Hz)，7.29(1H，dd，H-6，J2-62.0Hz，J5-68.0Hz)描述133-芐氧基-4-溴苯甲酸芐酯 在13.1℃、氬氣氛、攪拌下，用1.25小時(shí)向NaH(10.47g，60％重量，0.2616mol)在THF(1.40L)內(nèi)的懸浮液中加入4-溴-3-羥基苯甲酸(28.11g，0.130mol)在THF(400ml)中的溶液，同時(shí)將內(nèi)溫保持在4-15℃。1.5小時(shí)后，用0.5小時(shí)加入芐基溴(44.3g，0.2591mol)在THF(70ml)中的溶液。向所得懸浮液中加入DMF(500ml)，并將該混合物溫?zé)嶂潦覝亍?5小時(shí)后，向該懸浮液中加入額外的DMF(1.5L)。約30分鐘后，該反應(yīng)混合物變得基本上澄清，TLC分析(25％EtOAc/己烷)表明所有原料都已消耗完畢。將該反應(yīng)混合物用稀氯化銨(100ml)處理，并真空濃縮。向該濃縮物中加入乙酸乙酯(1.0L)和稀氯化銨(1.0L)，并分離各層。用乙酸乙酯(1×450ml和1×300ml)返萃取水層。用硫酸鈉將總有機(jī)層干燥，過濾并真空濃縮。將所得固體從加熱回流的乙醇∶水(9∶1；vol∶vol，200ml)中結(jié)晶，對此，向其中加入乙醇(65ml)直至所有物質(zhì)都溶解。然后依次滴加水(17ml)，與額外的乙醇(8.0ml)。將所得溶液緩慢地冷卻至室溫。將所得固體過濾并干燥(44.54g)。然后將該固體溶解在熱的乙醇(227ml)中，加入水(5.0ml)，然后緩慢地冷卻至室溫。過濾出所得晶體，用冷的乙醇(25ml)洗滌，并在真空烘箱中于50℃干燥，獲得了本標(biāo)題化合物(36.79g，產(chǎn)率71.5％)。mp＝80.5-81.5℃。1H NMR(400.13 MHz，CDCl3)7.67-7.28(13H，復(fù)雜的m，芳環(huán))，5.35(2H，s，CH2Ph)，5.20(2H，s，CH2Ph).描述143-芐氧基-4-三甲基甲硅烷基乙炔基苯甲酸芐酯 將3-芐氧基-4-溴苯甲酸芐酯(33.00g，83.07mmol)置于三頸燒瓶中，并在真空下使用Firestone閥用氬氣替換其中的空氣。在攪拌下將該固體溶解在THF(215ml)中，然后加入三乙胺(396ml)。將該混合物在冰/水浴中冷卻，并如上所述將該溶液脫氣5次。迅速加入碘化亞銅(I)(127mg，0.66mmol)和氯化二(三苯基膦)鈀(II)(933mg，1.33mmol)，并將該溶液再脫氣2次。然后用10分鐘通過注射器滴加三甲基甲硅烷基乙炔(17.6ml，124.6mmol)。移去冷卻浴，并將該溶液緩慢地溫?zé)嶂潦覝亍?1小時(shí)后，TLC分析(25％EtOAc/己烷)表明基本上所有原料都已消耗完畢。通過真空下蒸發(fā)除去溶劑，并加入乙酸乙酯(500ml)和稀鹽水(300ml)。分離出有機(jī)層，并用乙酸乙酯(1×250ml和1×100ml)返萃取水層。用硫酸鈉將總的有機(jī)層干燥，過濾并蒸發(fā)，獲得了粗產(chǎn)物，為棕色固體(36.2g)。將該固體溶解在熱的乙酸乙酯(80ml)中，結(jié)晶出了本標(biāo)題化合物。通過過濾分出該固體，用乙酸乙酯洗滌，并在真空烘箱中于40℃干燥，獲得了純的本標(biāo)題化合物(13.75g，產(chǎn)率39％)，mp＝110.5-111.5℃。1H NMR(400.13M Hz，CDCl3)7.66-7.28(13H，復(fù)雜的m，芳環(huán))，5.36(2H，s，CH2Ph)，5.19(2H，s，CH2Ph)，0.26(9H，s，Si(Me3)3).
將濾液施加在硅膠硅膠筒(400g，Biotage 75M)上，然后用50％乙酸乙酯/己烷洗脫，合并含有產(chǎn)物的級分，并真空濃縮，獲得了本標(biāo)題化合物(21.1g，產(chǎn)率60％)，為稍微不純的淺棕色固體，不用純化直接使用。描述153-芐氧基-4-乙炔基苯甲酸芐酯 在-55℃、氬氣氛下，用7分鐘向3-芐氧基-4-三甲基甲硅烷基乙炔基苯甲酸芐酯(13.5g，32.56mmol)在THF(182ml)內(nèi)的攪拌溶液中滴加氟化四正丁基銨溶液(33.9ml，1.0M THF溶液)。3分鐘后，取樣，TLC分析(25％EtOAc/己烷)表明所有原料都已消耗完畢。通過加入鹽酸(0.4M，100ml)在稀氯化銨中的溶液來中止該反應(yīng)。然后加入乙酸乙酯(250ml)，并分離各層。用乙酸乙酯(1×200ml和1×50ml)返萃取水層。用硫酸鈉將總的有機(jī)層干燥，過濾并蒸發(fā)，獲得了棕色油狀物(14.3g)。將該油狀物溶于甲苯(40ml)中，并施加到硅膠筒(400g，Biotage 75M)上。然后如下所述洗脫該硅膠筒∶己烷(400ml)，己烷∶甲苯(1∶1，vol∶vol，5.0L)，最后是含有4％乙醚的己烷∶甲苯(1∶1，vol∶vol，2.3L)。合并純的級分，并真空蒸發(fā)，獲得了本標(biāo)題化合物(7.86g，產(chǎn)率70.5％)，為白色固體。1H NMR(400.13MHz，CDCl3)7.67-7.27(13H，復(fù)雜的m，芳環(huán))，534(2H，s，CH2Ph)，5.22(2H，s，CH2Ph)，3.44(1H，s，炔氫).描述164，5-二氯-2-碘苯胺 在室溫、氬氣氛下，用22分鐘向3，4-二氯苯胺(1.944g，12.0mmol)在乙酸(40ml)內(nèi)的攪拌溶液中滴加一氯化碘(2.96g，18.23mmol)在乙酸(25ml+5ml洗滌)中的溶液。攪拌1.5小時(shí)后，沉淀出了固體，將其過濾，并用5％硫代硫酸鈉(100ml)洗滌。將該固體溶解在乙酸乙酯(100ml)中，并用飽和碳酸鈉(100ml)和水(100ml)洗滌。用硫酸鈉將所得固體干燥，過濾并蒸發(fā)，獲得了暗色固體(2.69g)。將固體粗產(chǎn)物溶解在EtOAc/己烷(1∶1，vol∶vol，6.0ml)中，并施加到二氧化硅筒(90g，Biotage)上，如下所述進(jìn)行洗脫己烷(600ml)，4％EtOAc在己烷中的混合物(1L)，和5％EtOAc在己烷中的混合物(1L)。將純級分真空濃縮，獲得了本標(biāo)題化合物，為黃白色固體(0.912g，產(chǎn)率26.4％)。1H NMR(400.13MHz，CDCl3)7.66(1H，s，H-3)，6.81(1H，s，H-6)，4.14(2H，bs，-NH2).MS(AP+)m/z 288.0和290.1(MH+).描述174-(2-氨基-4，5-二氯-苯基乙炔基)-3-芐氧基苯甲酸芐酯 將3-芐氧基-4-乙炔基苯甲酸芐酯(820mg，2.395mmol)和4，5-二氯-2-碘苯胺(710mg，2.467mmol)置于三頸燒瓶中，并在真空下使用Firestone閥用氬氣替換其中的空氣。在攪拌下將該固體溶解在THF(13.0ml)中，然后加入三乙胺(20ml)。將該混合物在冰/水浴中冷卻，并如上所述將該溶液脫氣4次。迅速加入碘化亞銅(I)(4mg，0.02mmol)和氯化二(三苯基膦)鈀(II)(27mg，0.04mmol)，并將該溶液再脫氣2次。在室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC分析(25％EtOAc/己烷)表明所有原料3-芐氧基-4-乙炔基苯甲酸芐酯都已消耗完畢，通過真空蒸發(fā)除去溶劑，并加入乙酸乙酯(50ml)和稀的碳酸氫鈉(25ml)。分離出有機(jī)層，并用乙酸乙酯(1×25ml)返萃取水層。用硫酸鈉將總的有機(jī)層干燥，過濾并真空濃縮，獲得了淺黃色固體(1.28g)。將該固體溶解在氯仿(50ml)中，加入硅膠(Merck 9385，3.25g)，并將該混合物真空濃縮。通過色譜法(Biotage 40g)純化預(yù)負(fù)載在二氧化硅上的粗產(chǎn)物。用氯仿∶己烷(70∶30)洗脫硅膠筒，合并純級分，并真空濃縮，獲得了本標(biāo)題化合物(1.113g，產(chǎn)率92.5％)，為淺黃色固體。將樣本從甲苯∶氯仿(45∶55)中重結(jié)晶，mp＝152.5-153.5℃。1H NMR(400.13MHz，CDCl3)7.71(2H，m，芳環(huán))，7.57-7.20(12H，復(fù)雜的m，芳環(huán))，6.63(1H，s，芳環(huán))，5.38(2H，s，CH2Ph)，5.15(2H，s，CH2Ph)，3.94(2H，s，-NH2).MS(AP+)m/z 502.2和502.4(MH+).描述183-芐氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸芐酯
在氬氣氛、攪拌下，將4-(2-氨基-4，5-二氯-苯基乙炔基)-3-芐氧基苯甲酸芐酯(28.32g，56.38mmol)溶解在溫的乙腈(1.50L)中。將該混合物在冰/水浴中冷卻，使用Firestone閥在低真空下將該溶液脫氣，用氬氣替換其中的空氣。將該操作重復(fù)5次。將該攪拌的混合物溫?zé)嶂?6℃，并迅速加入氯化二(乙腈)鈀(II)(1.666g，5.638mmol)，然后溫?zé)嶂?5℃。1.5小時(shí)后，取樣，并通過TLC(25％EtOAc/己烷)分析，結(jié)果表明所有原料都已消耗完畢。將該反應(yīng)緩慢地冷卻至室溫，從溶液中結(jié)晶出了本標(biāo)題化合物。通過過濾取出該固體，用冷的乙腈(125ml)洗滌，并在真空烘箱中干燥，獲得了本標(biāo)題化合物(21.375g，產(chǎn)率75.5％)，為白色固體，mp＝168-169℃。1H NMR(400.13MHz，CDCl3)9.79(1H，bs，-NH)，7.90-7.76(3H，復(fù)雜的m，芳環(huán))，7.68(1H，s，芳環(huán))，7.55-7.32(10H，復(fù)雜的m，芳環(huán))，7.22(1H，s，芳環(huán))，6.91(1H，m，芳環(huán))，5.39(2H，s，CH2Ph)，5.29(2H，s，CH2Ph).MS(AP+)m/z 502.2和502.4(MH+).描述193-芐氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸 將3-芐氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸芐酯(0.2g，0.398mmol)在EtOH(10ml)和THF(5ml)中的溶液與NaOH(5.3mg，1.33mmol)回流3小時(shí)。冷卻后，真空除去溶劑，并用37％HCl處理殘余物。過濾出沉淀，用水洗滌，并真空干燥，獲得了0.14g(產(chǎn)率85％)本標(biāo)題化合物，為黃色固體。mp＝＞250℃。實(shí)施例14-(5，6-二氯-IH-吲哚-2-基)-3-乙氧基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-苯甲酰胺 向如在描述8中制得的3-乙氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-苯甲酸(200mg，0.57mmol)在CH3CN(14ml)和THF(6ml)內(nèi)的懸浮液中加入WSC(N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽)(104mg，55mmol)和1-羥基苯并三唑(77mg，0.57mmol)，并將該反應(yīng)回流3小時(shí)。將4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶(108mg，0.7mmol)加到該反應(yīng)混合物中，并繼續(xù)回流2小時(shí)。將該反應(yīng)冷卻，并真空除去溶劑。用30ml 10％NaOH處理該殘余物，然后過濾。用水洗滌所得固體，干燥并通過硅膠色譜純化，獲得了154mg本標(biāo)題化合物，為淺黃色粉末(產(chǎn)率55％)，mp＝253-255℃。1H NMR(DMSO-d6)δ＝11.56(s br，1H)；8.28(d br，1H)；7.85(d，1H)；7.82(s，1H)7.64(s，1H)；7.59(s，1H)；7.57(d，1H)；7.11(s，1H)；4.40-4.21(m，1H)；4.30(q，2H)；1.80(dbr，2H)；1.50(t，3H)；1.30(m，2H)；1.28(s，6H)；1.15(s，6H).ESI POS；AQA；溶劑MeOH/噴霧3 kV/撇沫板20 V/探針135℃m/z 488(MH+)實(shí)施例24-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-芐氧基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-苯甲酰胺 向如在描述9中制得的3-芐氧基-4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)苯甲酸(0.14g，0.34mmol)在THF(14ml)內(nèi)的溶液中加入WSC(N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽)(0.078g，0.408mmol)和1-羥基苯并三唑(0.0551g，0.408mmol)，并回流6小時(shí)。滴加4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶(0.064g，0.408mmol)在THF(2ml)中的溶液，并再回流2小時(shí)。真空除去溶劑，并將殘余物懸浮在水中。過濾出固體，并真空干燥。用CH3CN(5ml)研制該固體，獲得了0.094g(產(chǎn)率45％)本標(biāo)題化合物，為白色粉末，mp＝220℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ＝11.64(s br，1H)；8.24(d br，1H)；7.87(d，1H)；7.76(s，1H)；7.68(d，1H)；7.62(s，1H)；7.59(dd，1H)；7.52(d，2H)；7.42(dd，2H)；7.34(dd，1H)；7.06(d，1H)；5.40(s，2H)；4.38-4.23(m，1H)；1.76(dd，2H)；1.25(dd，2H)；1.23(s，6H)；1.12(s，6H).ESI POS；AQA；溶劑MeOH/噴霧3 kV/撇沫板20 V/探針135℃m/z 550(MH+)實(shí)施例34-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-羥基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-苯甲酰胺 將如實(shí)施例2所述制得的4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-芐氧基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶4-基)-苯甲酰胺(0.08g，0.145mmol)在37％HCl(5ml)和EtOH(5ml)中的混合物回流3小時(shí)。冷卻后，真空除去溶劑。通過硅膠柱色譜純化所得固體(CH2Cl2/MeOH/NH4OH86∶10∶0.6)，用CH3CN研制后，獲得了0.02g(產(chǎn)率39％)本標(biāo)題化合物，為白色固體，mp＞270℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ＝11.44(s br，1H)；8.16(d br，1H)；7.80(d，1H)；7.78(s，1H)；7.69(s，1H)；7.48(d，1H)；7.39(dd，1H)；7.08(s，1H)；4.36-4.20(m，1H)；1.73(dd，2H)；1.23(dd，2H)；1.23(s，6H)；1.11(s.6H).ESI POS；AQA；溶劑MeOH/噴霧3 kV/撇沫板20 V/探針135℃m/z 460(MH+)實(shí)施例44-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-丙氧基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺 將如實(shí)施例3所述制得的4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-羥基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-苯甲酰胺(0.05g，0.109mmol)、K2CO3(0.045g，0.33mmol)和2-溴-丙烷(0.046mg，0.33mmol)在丙酮(5ml)中的混合物回流8小時(shí)。冷卻后，將該混合物過濾，將有機(jī)相真空干燥，通過硅膠色譜純化殘余物，用CH2Cl2/MeOH/NH4OH32％(86∶10∶0.6)洗脫。用iPr2O研制所獲得的化合物，并過濾，獲得了0.017mg(產(chǎn)率37％)本標(biāo)題化合物，為白色粉末，mp＞250℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ＝11.55(s br，1H)；8.19(d br，1H)；7.84(d，1H)；7.83(s，1H)；7.62(s，1H)；7.58(s，1H)7.56(d d，1H)；7.10(d，1H)；4.37-4.24(m，1H)；4.18(t，2H)；1.96-1.84(m，2H)；1.73(dd，2H)；1.20(dd，2H)；1.20(s，6H)；1.08(s，6H)；1.05(t，3H).ESI POS；AQA；溶劑MeOH/噴霧3 kV/撇沫板20 V/探針135℃m/z 502(MH+)。在表1中所列出的實(shí)施例化合物是依據(jù)實(shí)施例1的方法制備的。
表1 在表2中所列出的實(shí)施例化合物是依據(jù)實(shí)施例4的方法制備的。
表2 生物測定背景已知，通過附著在骨上，生電H+-腺苷三磷酸酶(ATP酶)被極化到破骨細(xì)胞-骨界面上。該泵將大量質(zhì)子運(yùn)輸?shù)轿瘴h(huán)境中，以影響骨物質(zhì)代謝，并產(chǎn)生膠原酶降解骨基質(zhì)所需的酸性pH。
該破骨細(xì)胞質(zhì)子泵的空泡性質(zhì)最初是由Blair[H.C.Blair等人，Science，245，855(1989)]識別的，并由Bekker[P.J.Bekker等人，J.Bone Min.Res.，5，569(1990)]和Vnnen[H.K.Vnnen等人，J.Cell.Biol.，111，1305(1990)]證實(shí)。該證據(jù)是基于從鳥破骨細(xì)胞中制備破碎的膜碎片(得自禁食鈣產(chǎn)蛋母雞的髓骨)。所得膜囊在ATP的作用下酸化，這易于通過測定吖啶橙—一種積聚到酸性隔室內(nèi)的弱堿的熒光猝滅來評價(jià)。
該生物模式表明破骨細(xì)胞質(zhì)子泵屬于空泡樣ATP酶，因?yàn)镹-乙基馬來酰亞胺(NEM)-一種含巰基的試劑、和巴菲羅美辛A1-一種選擇性空泡H+-ATP酶抑制劑抑制了質(zhì)子運(yùn)輸[J.E.Bowman等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85,7972(1988)]，而其沒有被哇巴因-一種Na+/K+-ATP酶、原釩酸鈉-一種P-ATP酶抑制劑、或奧美拉唑或SCH 28080-二者都是胃H+/K+-ATP酶抑制劑所抑制[J.P.Mattsson等人，Acta Physiol.Scand.，146，253(1992)]。
已知空泡ATP酶的特定抑制劑例如巴菲羅美辛A1能夠抑制破骨細(xì)胞組織中的骨吸收[K.Sundquist等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.168，309-313(1990)]。抑制膜囊中的質(zhì)子運(yùn)輸和v-ATP酶活性從禁食鈣的產(chǎn)蛋母雞中制備骨微粒體粗產(chǎn)物膜囊是由得自產(chǎn)蛋母雞的脛骨和股骨的髓骨制備的，其中所述母雞禁食鈣至少15天。簡言之，用24解剖刀片切下骨碎片，懸浮在40ml分離培養(yǎng)基(0.2M蔗糖，50mM KCl，10mM Hepes，1mM EGTA，2mM二硫蘇糖醇，pH7.4)中，并經(jīng)由100μm孔徑的尼龍網(wǎng)過濾。整個(gè)操作都是在4℃進(jìn)行的。在40ml分離培養(yǎng)基中在陶器(20沖程)內(nèi)均化后，進(jìn)行首次離心(6,500×gmax×20分鐘)以除去線粒體和溶酶體。將上清液以100,000×gmax離心1小時(shí)，把離心團(tuán)收集在1ml分離培養(yǎng)基中，分成200μl的等分試樣，立即在液氮中冷凍，并在-80℃貯存。使用Biorad比色試劑盒依據(jù)Bradford的方法[M.Bradford，Anal.Biochem.，72，248(1976)]測定蛋白含量。使用5-10μl膜制備物進(jìn)行質(zhì)子運(yùn)輸測定。純化破骨細(xì)胞膜將1ml如上所述制得的微粒體囊施加到(約0.2ml/管)由3.5ml15％、30％和45％(w/w)蔗糖在分離培養(yǎng)基中的混合物構(gòu)成的蔗糖梯度的頂部上，并以280,000gmax離心2小時(shí)(SW 41 Ti rotor)。離心后，收集30-45％蔗糖界面，在分離培養(yǎng)基中稀釋約20倍，并以100,000gmax離心1小時(shí)(SW 28 rotor)。將離心團(tuán)重懸在1ml分離培養(yǎng)基中，分成等分試樣，在液氮中冷凍，并在-80℃貯存直至使用。人腎膜依據(jù)文獻(xiàn)中報(bào)道的關(guān)于牛腎的方法(S.Gluck，J.Biol. Chem.，265，21957(1990))，手術(shù)后，將得自人腎皮層的人腎膜立即冷凍。制備人破骨細(xì)胞微粒體囊用玻璃-聚四氟乙烯勻化器(1000rpm×20沖程)將得自破骨細(xì)胞瘤的破骨細(xì)胞樣巨細(xì)胞均化，并將均化物以6000×gmax離心20分鐘。然后將所得離心團(tuán)以100000×gmax離心60分鐘以沉降出微粒體部分。重懸在1ml pH7.4的離心培養(yǎng)基中，通過浸入在液氮中冷凍，并在-80℃貯存直至使用。膜囊中的質(zhì)子運(yùn)輸將5-20μl膜囊加到含有0.2M蔗糖，50mM KCl，10mM HepespH7.4，1mM ATP.Na2，1mM CDTA，5μM纈氨霉素和4μM吖啶橙的1ml緩沖液中。加入5mM MgSO4來開始反應(yīng)。通過測定吖啶橙熒光猝滅的初始斜率來半定量評估膜囊中的質(zhì)子運(yùn)輸(激發(fā)490nm；發(fā)射530nm)。結(jié)果以占兩個(gè)對照的平均值的百分比表示。巴菲羅美辛-敏感性ATP酶活性的抑制在純化的膜囊中通過測定在或不在巴菲羅美辛A1存在下在96孔平板中于37℃培養(yǎng)的30分鐘期間內(nèi)的無機(jī)磷酸鹽(Pi)釋放來評估抑制巴菲羅美辛-敏感性ATP酶活性。該反應(yīng)培養(yǎng)基含有1mM ATP，10mM HEPES-Tris pH8，50mM KCl，5μM纈氨霉素，5μM尼日利亞菌素，1mM CDTA-Tris，100μM鉬酸銨，0.2M蔗糖和膜(20μM蛋白/ml)。通過加入MgSO4(8-臂移液管)開始反應(yīng)，30分鐘后，加入4體積依據(jù)Chan的方法[Anal.Biochem.157，375(1986)]制備的孔雀綠試劑(96-臂移液管)來終止反應(yīng)。2分鐘后，使用微板讀數(shù)器測定在650 nm的吸收度。結(jié)果以nmol(Pi)×mg蛋白-1×分鐘-1表示，并且對于每個(gè)實(shí)驗(yàn)，代表著一式三份的平均值±sem。藥理數(shù)據(jù)本發(fā)明化合物能夠以50nM-2μM抑制雞破骨細(xì)胞中的巴菲羅美辛-敏感性ATP酶，以30nM-5μM抑制人破骨細(xì)胞中的巴菲羅美辛-敏感性ATP酶。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物 或其鹽、或其溶劑化物，其中R1和R2分別獨(dú)立地代表C1-6烷氧基或鹵素；R3和R4分別獨(dú)立地代表氫、C1-6烷氧基、芳基C1-6烷氧基、羥基、羧基C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、二羥基C1-6烷氧基、一-和二-(C1-6烷基)氨基C1-6烷氧基或氨基C1-6烷氧基，且R5代表-NRsRt，其中Rs和Rt分別獨(dú)立地代表氫、未取代或取代的C1-6烷基、或未取代或取代的雜環(huán)基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2分別獨(dú)立地代表甲氧基或氯。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1是5-氯，且R2是6-氯。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R3是羥基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、芐氧基、羧基乙氧基、羥基乙氧基、二羥基丙氧基、二甲基氨基乙氧基或氨基丙氧基。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R4是氫或甲氧基。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中Rs或Rt代表未取代或取代的C1-6烷基、或未取代或取代的雜環(huán)基。
7.權(quán)利要求1或6的化合物，其中Rs或Rt代表3-[4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]丙基或3-[4-(2-嘧啶基)哌嗪-1-基]丙基。
8.權(quán)利要求1的化合物，其中Rs或Rt代表未取代或取代的哌啶基。
9.權(quán)利要求1或8的化合物，其中Rs或Rt代表1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基或2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中Rt是氫。
11.式(IA)化合物或其鹽或其溶劑化物 其中R1、R2、R3、R4、和R5如權(quán)利要求1的式(I)中所定義，Rs是3-[4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]丙基或3-[4-(2-嘧啶基)哌嗪-1-基]丙基，且Rt是氫。
12.式(IB)化合物或其鹽或其溶劑化物 其中R1、R2、R3、R4、和R5如權(quán)利要求1的式(I)中所定義，Rs是3-吡啶基或3-(6-甲氧基)吡啶基，且Rt是氫。
13.式(IC)化合物或其鹽或其溶劑化物 其中R2、R4、和R5如權(quán)利要求1的式(I)中所定義，Rs是2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基，Rt是氫，R3是3-乙氧基，且R1是5-氯或5-甲氧基。
14.式(ID)化合物或其鹽或其溶劑化物 其中R1、R2、R4、和R5如權(quán)利要求1的式(I)中所定義，Rs是2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基，Rt是氫，且R3是2-甲氧基、3-甲氧基、3-乙氧基、3-丙氧基、3-芐氧基、3-(2-羧基乙氧基)、3-(2-羥基乙氧基)、3-(2，3-二羥基丙氧基)、3-(2-二甲基氨基乙氧基)或3-(3-氨基丙氧基)和3-羥基，且R4是5-甲氧基或氫。
15.式(IE)化合物或其鹽或其溶劑化物 其中R1、R2、R4、和R5如權(quán)利要求1的式(I)中所定義，Rs是1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基，Rt是氫，R3是2-甲氧基或3-乙氧基，且R4是5-甲氧基或氫。
16.式(IF)化合物或其鹽或其溶劑化物 其中R1、R2、R3、R4、和R5如權(quán)利要求1的式(I)中所定義，Rs是1-芐基哌啶-4-基、1-(4-乙氧基羰基)丁基哌啶-4-基、1-(4-羥基羰基)丁基哌啶-4-基，且Rt是氫。
17.選自下列的化合物4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-乙氧基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-芐氧基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-羥基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-丙氧基-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-[3-[4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]丙基]-3-甲氧基苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-[3-[4-(2-嘧啶基)哌嗪-1-基]丙基]-3-甲氧基苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基)-3-乙氧基苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(3-吡啶基)-3-乙氧基苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(3-(6-甲氧基吡啶基))-3-乙氧基苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(1-芐基哌啶-4-基)-3-乙氧基苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-2，5-二甲氧基苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基)-2，5-二甲氧基苯甲酰胺；4-(5-甲氧基-6-氯-1H-吲哚-2-基)-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-3-乙氧基苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-((1-乙氧基羰基戊基)哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-3-甲氧基-N-((羧基丁基)哌啶-4-基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-3-(羥基羰基甲氧基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-3-(2-羥基乙氧基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-3-(3-氨基-丙氧基)苯甲酰胺；4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-3-(2-二甲基氨基-乙氧基)苯甲酰胺；和4-(5，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-N-(2，2，6，6-四甲基哌啶-4-基)-3-(2，3-二羥基-丙氧基)苯甲酰胺。
18.制備權(quán)利要求1的式(I)化合物或其鹽或其溶劑化物的方法，所述方法包括用式(III)化合物HNRs’Rt’(III)其中Rs’和Rt’分別代表如式(I)中所定義的Rs和Rt或其保護(hù)形式，將式(II)化合物酰胺化 其中R1’、R2’、R3’、和R4’分別代表如式(I)中所定義的R1、R2、R3、和R4或其保護(hù)形式，然后按照需要進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)下述步驟(i)將一種式(I)化合物轉(zhuǎn)化成另一種式(I)化合物；(ii)除去任何保護(hù)基；(iii)制備所形成的化合物的鹽或溶劑化物。
19.治療和/或預(yù)防哺乳動物中與破骨細(xì)胞過度活動有關(guān)的疾病的方法，該方法包括施用有效無毒量的權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
20.在人或非人哺乳動物中治療骨質(zhì)疏松以及相關(guān)的骨質(zhì)稀少疾病的方法，包括給需要治療的人或非人哺乳動物施用有效無毒量的權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
21.在人或非人哺乳動物中治療腫瘤，尤其是腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病，病毒性病癥(例如涉及塞姆利基森林病毒、水皰性口炎病毒、新城病病毒、流感A和B病毒、HIV病毒的病癥)，潰瘍(例如慢性胃炎和由幽門螺桿菌引起的消化潰瘍)，自身免疫性疾病和移植，治療和/或預(yù)防高膽固醇血以及動脈粥樣硬化疾病，AIDS和阿爾茨海默氏病，血管生成性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤的方法，該方法包括給需要治療的人或非人哺乳動物施用有效無毒量的權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
22.用作活性治療物質(zhì)的權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
23.可用于治療或預(yù)防哺乳動物中與破骨細(xì)胞過度活動有關(guān)的疾病的權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
24.可用于治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松以及相關(guān)骨質(zhì)稀少疾病的權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物。
25.具有下述用途的權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物在人或非人哺乳動物中治療腫瘤，尤其是腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病，病毒性病癥(例如涉及塞姆利基森林病毒、水皰性口炎病毒、新城病病毒、流感A和B病毒、HIV病毒的病癥)，潰瘍(例如慢性胃炎和由幽門螺桿菌引起的消化潰瘍)，自身免疫性疾病和移植，治療和/或預(yù)防高膽固醇血以及動脈粥樣硬化疾病，AIDS和阿爾茨海默氏病，血管生成性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤。
26.藥物組合物，其中包含權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物與可藥用載體。
27.權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物在制備用于治療和/或預(yù)防哺乳動物中與破骨細(xì)胞過度活動有關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
28.權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物在制備用于治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松以及相關(guān)骨質(zhì)稀少疾病的藥物中的應(yīng)用。
29.權(quán)利要求1的式(I)化合物或其可藥用鹽或其可藥用溶劑化物在制備具有下述作用的藥物中的應(yīng)用用于治療腫瘤，尤其是腎癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、肺癌和白血病，病毒性病癥(例如涉及塞姆利基森林病毒、水皰性口炎病毒、新城病病毒、流感A和B病毒、HIV病毒的病癥)，潰瘍(例如慢性胃炎和由幽門螺桿菌引起的消化潰瘍)，自身免疫性疾病和移植，用于治療和/或預(yù)防高膽固醇血以及動脈粥樣硬化疾病，AIDS和阿爾茨海默氏病，血管生成性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、牛皮癬和實(shí)體瘤。
全文摘要
式(I)化合物或其鹽、或其溶劑化物,其中R
文檔編號C07D209/18GK1370159SQ00811597
公開日2002年9月18日 申請日期2000年6月16日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月18日
發(fā)明者C·法里納, S·加利爾蒂, P·A·T·諾維拉 申請人:史密絲克萊恩比徹姆股份公司