專利名稱：一種利用丙二酰基人參皂苷制備人參稀有皂苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人參皂苷制備方法，公開了一種用丙二?；藚⒃碥罩苽淙藚⑾∮性碥?0R-Rg3、20S-Rg3、Rkl和Rg5的方法，屬于中醫(yī)藥有效成分提取分離技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及的丙二?；藚⒏奋?Malonyl-ginsenosides)是人參中的天然原苷，又叫丙二酸單?；藚⒃碥?，也被稱為酸性皂苷，主要包括丙二?；藚⒃碥?Rb1'-Rb2、-Re和-Rd。1983年，Kitagawa等首次報道了從日本產(chǎn)生曬參中分離出4種丙二?；藚⒃碥?；周雨等(1998)從西洋參中分離出了丙二?；藚⒃碥誖b1 ;孫光芝等(2007)從國產(chǎn)鮮人參中分離鑒定了 5種丙二?；藚⒃碥?M-Rb1, M-Rb2, M-Rc, M-Rd,M-NR4),其中M-NR4是首次獲得的新化合物。Chuang等(1995)報道了不同人參制品中丙二?；藚⒃碥盏暮空既藚⒖傇碥蘸康?5-60%。Kite等(2003)采用液質(zhì)聯(lián)用分析了人參、西洋參和三七中丙二酰基人參皂苷，認為丙二?；藚⒃碥崭鲉误w成分在這些藥材中的比例不同，可以作為化學特征用來區(qū)分這些藥材。然而由于丙二?；藚⒃碥諛O易溶于水，不溶于乙醇，難容于正丁醇、氯仿等，在人參皂苷工業(yè)化生產(chǎn)中多數(shù)隨水雜而流失，造成植物資源的巨大浪費。人參皂苷按照苷元的結(jié)構(gòu)不同分為二醇型人參皂苷(PPD)、三醇型人參皂苷(PPT)和齊墩果酸型人參皂苷。pro和PPT型人參皂苷都屬于達瑪烷型四環(huán)三萜類化合物，在人參皂苷中占大多數(shù)。稀有人參皂苷，如人參皂苷Rg3、F2、compound K、Rh2、Rh3等，在人參中微量存在或不存在。最新藥理學研究表明，這些稀有人參皂苷具有多種生理活性，其中抗癌活性非常顯著。目前人參的加工品主要有生曬參、紅參和黑參，研究表明在鮮人參和生曬參中有大量的丙二?；藚⒃碥盏拇嬖?；而紅參在加工的過程中需要在95-100°C下蒸煮2-3小時，黑參需要在98°C下蒸煮9次，每次3小時，由于丙二?；藚⒃碥辗肿又絮；I不穩(wěn)定，在加熱條件下會發(fā)生水解反應脫去丙二?；上鄳闹行匀藚⒃碥?由丙二?；藚⒃碥?Rb1' -Rb2, -Re、-Rd轉(zhuǎn)化成人參皂苷-Rb1' -Rb2, -Re、_Rd)，所以在紅參和黑參中沒有丙二?；藚⒃碥铡un等(2009)報道了采用HPLC-ELSD同時檢測生曬參、紅參和黑參中19種皂苷的方法，結(jié)果顯示在紅參中僅有少量的稀有皂苷的存在，而黑參由于蒸煮9次，中性皂苷也發(fā)生了大量的轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生了許多稀有人參皂苷如Rh4、Rg3、Rg5> F4、Rg6, Rk3、Rs3、Rs4等。為了獲得更多的人參稀有皂苷的轉(zhuǎn)化率，許多研究采用更高的溫度蒸煮人參。Sun等(2011)報道了使用高壓鍋120°C下蒸煮人參、西洋參和三七4小時，結(jié)果這些藥材中的中性人參皂苷大部分轉(zhuǎn)化成稀有皂苷，轉(zhuǎn)化途徑為二醇型皂苷Rh、Rb2、Re和Rd轉(zhuǎn)化成Rg3, Rg3再轉(zhuǎn)化成Rh2， Rg5和Rkl。三醇型皂苷Rg1' Re、Rf和Rg2轉(zhuǎn)化成Rh1, Rh1再轉(zhuǎn)化成Rk3和Rh4。然而丙二?；藚⒃碥赵诟邷卣糁笙率侨绾巫兓奈匆娢墨I報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開一種從丙二酰基人參皂苷制備人參稀有皂苷20R-Rg3、20S_Rg3、Rg5和Rkl的方法，可以最大限度的利用丙二?；藚⒃碥?，解決了現(xiàn)有制備工藝產(chǎn)品流失大的缺點。本發(fā)明的技術(shù)解決方案包括以下步驟
將(原皮)鮮人參和西洋參為原料，粉碎，用60-90%的乙醇(投藥量于乙醇用量之比為1/10-1/20)在室溫下超聲提取2-6次，每次20-60分鐘，將提取液在40°C條件下減壓回收溶劑，濃縮為水溶液，水溶液用正丁醇萃取3-6次，水層放到高壓鍋中110-150°C蒸煮10-40分鐘，取出蒸煮過的水層上大孔樹脂柱Dltll，先用水洗五個柱體積，再用50-90%乙醇洗脫，回收乙醇后，得到稀有人參皂苷20R-Rg3、20S-Rg3、Rg5和Rkl混合物。本發(fā)明產(chǎn)品可以制成片劑、膠囊劑、粉劑或注射劑等藥物學上的任何劑型，用于治療癌癥，腫瘤,糖尿病，高血脂癥,心肌或腦缺血,機體免疫功能受損，以及消化系統(tǒng)等疾病。本發(fā)明的積極效果在于采用新方法對丙二酰基人參皂苷進行了全轉(zhuǎn)化，既M-Rb1, M- Rb2, M-Rc、M-Rd 轉(zhuǎn)化成 20R-Rg3、20S-Rg3、1 &和 Rkl。充分利用了人參資源，最大限度地提取、富集人參稀有皂苷，達到簡單、快速、低成本富集的目的，為工業(yè)化生產(chǎn)、新藥制備提供方法保證。為了進一步說明本發(fā)明方法中丙二酰基人參皂苷轉(zhuǎn)化成稀有人參皂苷的途徑和轉(zhuǎn)化率，以下采用高效液相色譜法對轉(zhuǎn)化過程和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進行了定量分析實驗。1實驗材料和試劑
鮮人參采自撫松縣，經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)大學中藥材學院鄭毅男教授鑒定。色譜級乙腈(美國Fisher公司)，其他試劑為分析純。酸性皂苷標準品M-Rbp M-Rb2, M-Rc和M-Rd (為自制，經(jīng)IR、MS、NMR鑒定，HPLC測定其純度在99 %以上)；人參皂苷Rb1, Rb2' Re、Rd、20R-Rg3、20S-Rg3、Rg5和Rkl標準品(中國藥品生物制品檢驗所)。2實驗方法
2.1標準品溶液的配置精密稱取人參單體皂苷M-RbpM-RlvM-RcHcURbpRlvRc、Rd、20R-Rg3、20S-Rg3、Rg5和Rkl標準品各適量，用30%乙腈定容，得到濃度分別為1. 000mg/mL混和標準品儲備液，搖勻，即得，4 °C下低溫儲藏。2.2待測試樣品的制備鮮人參根粉碎，精密稱取10 g，用80%乙醇200 mL超聲提取3次，每次30 min, 40 1下濃縮提取液至20 mL，然后用正丁醇萃取4次，水層放于高壓鍋120°C下蒸煮30 min。將蒸煮后的水層濃縮至干,用30%乙腈溶解,定容至100 mL量瓶中，搖勻放置，用前以O(shè). 25 μ m的濾膜過濾，作為供試品溶液。另取一份已知含量的人參中性皂苷(Rh、Rb2、Re、Rd)粉末O. 5g，溶于20 mL蒸餾水中，在同樣條件下蒸煮，蒸后取出定容至100 mL量瓶中，搖勻放置，用前以O(shè). 25 μ m的濾膜過濾。2.3色譜條件色譜柱0)51 )511^5(18-]^(250 11111^4.6 111111，5 4 111);流動相乙腈(A)和 O. 05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(B);洗脫梯度為0_30 min, 26% (A) ; 30-35 min,26%-32%(A) ; 35-50 min, 32%-50% (A); 50-80 min, 50%_80%(A)。柱溫25 °C ;檢測波長203 nm ;流速:1· 5 mL/min ;進樣量20 μ L ;分析時間80 min。2.4標準曲線的繪制分別吸取上述對照品母液10，20，40，80，160，320，640 μ L，分別置于I mL量瓶中，加30%乙腈稀釋至刻度，制備成不同濃度的系列對照品溶液，分別精密吸取系列對照品溶液各20 μ L進樣。以色譜峰面積(7)為縱坐標，濃度U)為橫坐標。線性回歸得標準曲線。3實驗結(jié)果
結(jié)果表明丙二酰基人參皂苷在蒸煮后全部轉(zhuǎn)化成了稀有皂苷20R-Rg3、20S-Rg3、Rg5和Rkl (見附

圖1和附圖2)，轉(zhuǎn)化率達到了 100%，4種稀有皂苷20R-Rg3、20S-Rg3、Rg5和Rkl的含量明顯增加(見表I)。而中性皂苷在蒸煮前后并未發(fā)生轉(zhuǎn)化，這與其蒸煮時間較短有關(guān)，文獻報道中性皂苷在蒸煮4小時后發(fā)生轉(zhuǎn)化，說明丙二?；藚⒃碥崭硬环€(wěn)定，轉(zhuǎn)化所需時
表1.丙二?；藚⒃碥仗崛∫赫糁笄昂驢PLC-UV比較分析結(jié)果(％)
權(quán)利要求
1.一種利用丙二?；藚⒃碥罩苽淙藚⑾∮性碥盏姆椒?，包括以下步驟以鮮人參或西洋參為原料，粉碎，用10-20倍量60-90%的乙醇，在室溫下超聲提取2-6 次，每次20-60分鐘，將提取液在40°C條件下減壓回收溶劑，濃縮為水溶液，水溶液用正丁醇萃取3-6次，萃取后的水層放到高壓鍋中110-150°C下蒸煮10-40分鐘，取出蒸煮過的水層上大孔樹脂柱Dltll，先用水洗五個柱體積，再用50-90%乙醇洗脫，回收乙醇后，得到稀有人參皂苷 20R-Rg3、20S-Rg3、Rg5 和 Rkl。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備人參稀有皂苷的方法，其特征在于利用丙二?；藚⒃碥罩苽涞娜藚⑾∮性碥諡?0R-Rg3、20S-Rg3、Rg5和Rkl。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備人參稀有皂苷的方法，其特征在于高壓鍋蒸煮溫度為 120°C，時間為30分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備人參稀有皂苷的方法，其特征在于將鮮人參或西洋參粉碎，室溫下用80%乙醇超聲提取3次，減壓回收溶劑，濃縮為水溶液，水溶液用正丁醇萃取 4次，萃取后的水層放到高壓鍋中蒸煮。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種利用丙二?；藚⒃碥罩苽淙藚⑾∮性碥盏姆椒?，將鮮人參粉碎，室溫下用乙醇超聲提取，減壓回收溶劑，濃縮為水溶液，水溶液用正丁醇萃取，萃取后的水層放到高壓鍋中蒸煮，取出蒸煮過的水層上大孔樹脂柱，用乙醇洗脫，回收乙醇后，得到稀有人參皂苷20R-Rg3、20S-Rg3、Rg5和Rk1。此方法最大限度地將丙二?；藚⒃碥辙D(zhuǎn)化成藥用價值極高的人參稀有皂苷，具有操作簡單、快速、成本低廉、轉(zhuǎn)化率高，為人參稀有皂苷工業(yè)化生產(chǎn)、新藥制備提供方法保證。
文檔編號C07J17/00GK103030678SQ201210565188
公開日2013年4月10日 申請日期2012年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月24日
發(fā)明者劉志, 孫光芝, 阮長春 申請人:吉林農(nóng)業(yè)大學