人參皂苷Rb1和Rd組合及其在制備治療光感受器細(xì)胞死亡相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及人參皂苷Rb1和Rd組合在制備治療視網(wǎng)膜退行性病變藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用視網(wǎng)膜光損傷的小鼠模型，模擬多種視網(wǎng)膜退行性病變發(fā)生過程中的共同關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，研究人參皂苷Rb1和Rd組合對視網(wǎng)膜光損傷小鼠模型的干預(yù)效應(yīng)，結(jié)果表明該藥物組合能維持視網(wǎng)膜外核層形態(tài)、有效防止視網(wǎng)膜外核層退行性損傷、防止視網(wǎng)膜外核層厚度降低，抑制光感受器細(xì)胞死亡，拮抗視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及光感受器細(xì)胞氧化應(yīng)激、有效抑制視網(wǎng)膜損傷相關(guān)免疫炎癥反應(yīng)、顯著改善視網(wǎng)膜退行性病變。因此人參皂苷Rb1和Rd組合可用于制備治療包括年齡相關(guān)性黃斑變性、視網(wǎng)膜色素變性、Stargardt病、視錐?視桿細(xì)胞營養(yǎng)不良、糖尿病視網(wǎng)膜病變等在內(nèi)的多種視網(wǎng)膜退行性病變藥物。
【專利說明】
人參皂苷RbI和Rd組合及其在制備治療光感受器細(xì)胞死亡相 關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[00011本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及人參皂苷Rbl和Rd組合在制備治療以光 感受器細(xì)胞死亡、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及光感受器細(xì)胞氧化應(yīng)激為核心病理的包括年齡相 關(guān)性黃斑變性、Stargardt病、視錐-視桿細(xì)胞營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性及糖尿病視網(wǎng)膜病 變在內(nèi)的視網(wǎng)膜退行性病變藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 視網(wǎng)膜退行性疾病是一組以視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞氧化應(yīng)激、死亡及視網(wǎng)膜色素上 皮細(xì)胞氧化應(yīng)激為核心病理改變的，可引起視力障礙甚至失明的眼底病，其包括年齡相關(guān) 性黃斑變性、Stargardt病、視錐-視桿細(xì)胞營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性等。此外，光感受器細(xì) 胞過度氧化應(yīng)激是糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生的重要早期病理環(huán)節(jié)。針對光感受細(xì)胞死亡、視 網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及光感受器細(xì)胞氧化應(yīng)激的治療對上述相關(guān)視網(wǎng)膜退行性病變的發(fā)生 發(fā)展起到有效的干預(yù)作用。
[0003] 年齡相關(guān)性黃斑變性是世界范圍內(nèi)最常見的嚴(yán)重危害視力健康甚至致盲的視網(wǎng) 膜退行性病變的主要類型之一。我國流行病學(xué)調(diào)查顯示，50歲以上人群年齡相關(guān)性黃斑變 性的患病率近15.5%。人口老齡化直接導(dǎo)致年齡相關(guān)性黃斑變性的患病率逐年增加，已構(gòu) 成嚴(yán)重的社會公共衛(wèi)生問題。年齡相關(guān)性黃斑變性的臨床表現(xiàn)一般分為"干性"和"濕性"兩 種類型。干性老年黃斑變性，多發(fā)生于50歲以上。視力表現(xiàn)為緩慢進行性下降或視物變形， 占年齡相關(guān)性黃斑變性的發(fā)病的90%以上，目前尚無有效治療藥物。視錐、視桿細(xì)胞營養(yǎng)不 良是一組遺傳病，由ABCA4等基因突變引起，以視力減退、夜盲、視野縮小、光感受器功能不 良為主要特征，目前尚無有效治療藥物。視網(wǎng)膜色素變性是一種以遺傳因素為主導(dǎo)的進行 性、營養(yǎng)不良性的視網(wǎng)膜退行性病變，涉及基因多樣，甚至同一基因可在不同患者中表現(xiàn)為 不同的突變。主要表現(xiàn)為慢性進行性視野缺失、視盲、夜盲、視網(wǎng)膜電流圖異常、視力障礙甚 至失明，目前尚無有效治療藥物。糖尿病是高血糖引發(fā)的重大代謝性疾病之一。截止2012年 9月，全世界范圍內(nèi)約3億4千7百萬的人患有糖尿病。糖尿病已成為僅次于心血管疾病和腫 瘤的第三大非傳染性疾病。糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病并發(fā)癥中最為常見的一種，在糖尿 病進程的早期即可出現(xiàn)，在全世界范圍內(nèi)是導(dǎo)致失明的第一位因素。在糖尿病視網(wǎng)膜病變 發(fā)病率隨糖尿病病程的加長而逐漸升高，10年以上者發(fā)病率增至69 %-90 %。病程15年以上 的糖尿病患者約2%因視網(wǎng)膜病變而失明，約10%的患者表現(xiàn)為嚴(yán)重的視力損傷。光感受器 細(xì)胞過度氧化應(yīng)激的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療干預(yù)尚存在大量空白。
[0004] 人參皂苷Rbl化合物英文簡寫為Ginsenoside Rbl，中文化學(xué)名稱簡稱為人參皂苷 Rbl，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如式I所示。人參皂苷Rd化合物英文簡寫為Ginsenoside RcU中文化學(xué)名稱 簡稱為人參皂苷Rd，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式II所示。
[0005]
[0006] 光感受器細(xì)胞是指能夠感受光刺激，并產(chǎn)生神經(jīng)沖動傳向中樞神經(jīng)的感覺細(xì)胞， 在外界信息經(jīng)視覺系統(tǒng)傳入大腦過程中扮演著極其重要的角色，光感受器細(xì)胞包括視桿細(xì) 胞和視錐細(xì)胞，其中視桿細(xì)胞司暗視覺，視錐細(xì)胞司明視覺和精細(xì)視覺。光感受器細(xì)胞凋亡 的研究證實，光感受器細(xì)胞很脆弱，易受環(huán)境和光源的損傷，它是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)細(xì) 胞，一旦受損，不能再生。中國專利201210228744X，公開了柚皮素在制備抗視網(wǎng)膜光感受器 細(xì)胞凋亡的藥物中的應(yīng)用，化合物柚皮素對視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的光化學(xué)損傷具有保護作 用，且能抗視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的凋亡，可用于制備各種抗視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞凋亡藥物。 然而，現(xiàn)有文獻尚未報道人參皂苷Rbl和Rd組合在治療以光感受器細(xì)胞死亡、視網(wǎng)膜色素上 皮及光感受器細(xì)胞氧化應(yīng)激為核心病理的疾病，包括年齡相關(guān)性黃斑變性、視網(wǎng)膜色素變 性、Stargardt病、視錐-視桿細(xì)胞營養(yǎng)不良、糖尿病視網(wǎng)膜病變等視網(wǎng)膜退行性病變方面的 藥理活性。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種預(yù)防和/或治療視網(wǎng)膜退行性 病變的藥物組合物。
[0008] 本發(fā)明的再一的目的是，提供如上所述藥物組合物的用途。
[0009] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0010] -種預(yù)防和/或治療視網(wǎng)膜退行性病變的藥物組合物，所述藥物由下列原料藥制 備而成:人參皂苷Rbl、人參皂苷RcU所述人參皂苷Rbl、人參皂苷Rd的結(jié)構(gòu)式分別如式I及式 II所示。
[0011] 作為一種優(yōu)選實施方式，所述人參皂苷Rbl與人參皂苷Rd質(zhì)量比為26:5-10;
[0012]作為一種優(yōu)選實施方式，所述人參皂苷Rbl與人參皂苷Rd質(zhì)量比為26:9。
[0013] 作為一種優(yōu)選實施方式，所述藥物組合物包含如上所述治療有效量的藥物組合 物、及其藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體或稀釋劑。
[0014] 作為一種優(yōu)選實施方式，所述藥學(xué)上可接受的載體包括眼用溶劑的附加劑、注射 用附加劑、片劑用附加劑、表面活性劑和穩(wěn)定劑;所述人參皂苷Rbl和Rd組合為所述藥物組 合物的主要活性成分。
[0015] 本發(fā)明中，所述人參皂苷Rbl和Rd藥物組合物可單獨使用或者作為活性成分與其 他常規(guī)的輔料混合使用。
[0016] 作為一種優(yōu)選實施方式，所述藥物組合物還包括其他治療眼部疾病的藥物。
[0017] 為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
[0018] 第一方面，提供如上所述的藥物用于治療和/或預(yù)防視網(wǎng)膜退行性病變，所述視網(wǎng) 膜退行性病變是以視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞死亡為核心病理，或有視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞或光感 受器細(xì)胞的氧化應(yīng)激參與。
[0019] 作為一種優(yōu)選實施方式，所述視網(wǎng)膜退行性病變選自：年齡相關(guān)性黃斑變性、 Stargardt病、視錐-視桿細(xì)胞營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性和糖尿病視網(wǎng)膜病變。
[0020] 第二方面，提供如上所述的藥物組合物在制藥或試劑中的用途，所述藥物或試劑 用于保護視網(wǎng)膜的形態(tài)、結(jié)構(gòu)或功能。
[0021] 第三方面，提供如上所述的藥物組合物在制藥或試劑中的用途，所述藥物或試劑 用于抑制視網(wǎng)膜光損傷。
[0022] 第四方面，提供如上所述的藥物組合物在制藥或試劑中的用途，所述藥物或試劑 用于：
[0023] (1)用于預(yù)防或治療視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞死亡；
[0024] (2)用于預(yù)防或治療視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞或光感受器細(xì)胞過度氧化應(yīng)激；
[0025] (3)用于維持視網(wǎng)膜外核層形態(tài)；
[0026] (4)用于防止視網(wǎng)膜外核層厚度降低；
[0027] (5)用于抑制視網(wǎng)膜損傷相關(guān)免疫炎癥反應(yīng)。
[0028] 作為一種優(yōu)選實施方式，所述藥物組合物作為單一成分或與其他藥學(xué)上可接受的 成分構(gòu)成組合物用以制藥或試劑。
[0029]本發(fā)明中，所述藥物組合物人參皂苷Rbl和Rd是發(fā)明人在眾多人參皂苷中通過大 量實驗篩選而得到的，人參皂苷Rbl和Rd的組合具有藥效好、用量小的優(yōu)點。
[0030] 本發(fā)明優(yōu)點在于：
[0031] 本發(fā)明采用視網(wǎng)膜光損傷的小鼠模型，模擬多種視網(wǎng)膜退行性病變發(fā)生過程中的 共同病理環(huán)節(jié)，即光感受器細(xì)胞死亡、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及光感受器細(xì)胞氧化應(yīng)激，對人 參皂苷Rbl和Rd組合抗光感受器細(xì)胞死亡、抗視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激、抗視網(wǎng)膜損傷 相關(guān)免疫炎癥反應(yīng)、防治視網(wǎng)膜退行性病變發(fā)生的作用進行了研究，結(jié)果表明人參皂苷Rbl 和Rd組合對光損傷誘導(dǎo)的光感受器細(xì)胞大量死亡、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及光感受器細(xì)胞氧 化應(yīng)激、視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞退行性改變及視網(wǎng)膜損傷相關(guān)免疫炎癥反應(yīng)具有顯著的抑制 作用，能顯著治療并改善視網(wǎng)膜退行性病變，因此可用于制備治療包括年齡相關(guān)性黃斑變 性、視網(wǎng)膜色素變性、Stargardt病、視錐-視桿細(xì)胞營養(yǎng)不良、糖尿病視網(wǎng)膜病變等在內(nèi)的 多種視網(wǎng)膜退行性病變藥物。
【附圖說明】
[0032]附圖1為人參皂苷Rbl和Rd組合治療對光感受器細(xì)胞保護效應(yīng)的OCT鑒定結(jié)果。其 中正常對照小鼠接受50μ130 % DMSO溶劑對照，光損傷模型小鼠接受50μ130 % DMSO溶劑對 照，人參皂苷Rbl和Rd組合組小鼠接受50μ1人參皂苷Rbl和Rd組合治療，人參皂苷Rbl和Rd劑 量分別為65mg/kg和22.5mg/kg體重，所有治療均采用腹腔注射給藥，除正常對照小鼠外，治 療后30分鐘各組小鼠接受白光照射，光照條件為10,000Lux，持續(xù)30分鐘。光照后7天，小鼠 分別1%戊巴比妥鈉麻醉后散瞳，采用OCT進行視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)成像分析。No light:正常對照， 未接受光照;Lightjehicle:光損傷模型;Light_Rbl&Rd:人參皂苷Rbl和Rd組合治療及光 照組。
[0033]附圖2為人參皂苷Rbl和Rd組合治療對視網(wǎng)膜保護效應(yīng)的定量分析，OCT分析完成 后，對ONL厚度進行了定量分析。
[0034]附圖3為人參皂苷Rbl和Rd組合治療對視網(wǎng)膜保護效應(yīng)的組織病理學(xué)研究。所有小 鼠于7天OCT成像后處死，解剖取眼球，4%多聚甲醛固定，進行石蠟包埋和切片。4μπι厚的石 蠟切片進行Η&Ε染色。Η&Ε染色的結(jié)果進行顯微鏡觀察拍照及分析。
[0035]附圖4為人參皂苷Rbl和Rd組合治療對視網(wǎng)膜保護效應(yīng)的免疫組織化學(xué)研究。所有 小鼠于7天OCT成像后處死，解剖取眼球，4%多聚甲醛固定，進行石蠟包埋及切片。取4μπι厚 的石錯切片脫錯處理后進行Rhodopsin、opsin M及DAPI免疫染色，分別對視桿細(xì)胞外節(jié)、視 錐細(xì)胞基質(zhì)鞘以及細(xì)胞核進行免疫標(biāo)記。免疫組織化學(xué)結(jié)果進行顯微鏡觀察拍照及分析。 [0036]附圖5為人參皂苷Rbl和Rd組合抗視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及光感受器細(xì)胞氧化應(yīng)激 的研究。各組小鼠在光照后1天分別腹腔注射超氧化物陰離子熒光探針DHE，2小時后處死， 解剖取眼球，分離并剔除角膜及晶狀體，其余含視網(wǎng)膜部分進行4%多聚甲醛固定，進行冰 凍包埋及切片，取12μπι厚的冰凍切片對視網(wǎng)膜各層的紅色熒光結(jié)果進行顯微鏡觀察拍照及 分析。
[0037]附圖6為人參皂苷Rbl和Rd組合抗視網(wǎng)膜免疫炎癥細(xì)胞的激活增生的研究。各組小 鼠在光照后3天處死，分別解剖取眼球，分離并剔除角膜及晶狀體，其余含視網(wǎng)膜部分進行 4%多聚甲醛固定，進行冰凍包埋及切片，取12μπι厚的冰凍切片進行GFAP、Ibal及DAPI免疫 染色，分別對Muller膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞以及細(xì)胞核進行免疫標(biāo)記。免疫組織化學(xué)結(jié)果進 行顯微鏡觀察拍照及分析。
【具體實施方式】
[0038] 下面結(jié)合【具體實施方式】，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā) 明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限 定的范圍。
[0039] 本發(fā)明所用術(shù)語"可接受的"，指一個處方組分或活性成分對一般治療目標(biāo)的健康 沒有過分的有害影響。
[0040] 本發(fā)明所用術(shù)語"治療"，包括緩和、抑制或改善疾病的癥狀或狀況;抑制并發(fā)癥的 產(chǎn)生;改善或預(yù)防潛在代謝綜合癥;抑制疾病或癥狀的產(chǎn)生，如控制疾病或情況的發(fā)展;減 輕疾病或癥狀;使疾病或癥狀減退;減輕由疾病或癥狀引起的并發(fā)癥，或預(yù)防或治療由疾病 或癥狀引起的征兆。如本文所用，某一化合物或藥物組合物，給藥后，可以使某一疾病、癥狀 或情況得到改善，尤指其嚴(yán)重度得到改善，延遲發(fā)病，減緩病情進展，或減少病情持續(xù)時間。 無論固定給藥或臨時給藥、持續(xù)給藥或斷續(xù)給藥，可以歸因于或與給藥有關(guān)的情況。
[0041 ]本發(fā)明所用術(shù)語"藥學(xué)上可接受"這里指一種物質(zhì)，如載體或稀釋液，不會使化合 物的生物活性或性質(zhì)消失，且相對無毒，如，給予個體某物質(zhì)，不會引起不想要的生物影響 或以有害的方式與任何其含有的組分相互作用。
[0042] 實施例
[0043]本實施例中，通過非侵入性的視網(wǎng)膜眼底斷層掃描OCT技術(shù)、病理學(xué)及免疫組織化 學(xué)的研究手段，明確了人參皂苷Rbl和Rd組合對視網(wǎng)膜光損傷小鼠模型的干預(yù)效應(yīng)。研究結(jié) 果表明人參皂苷Rbl和Rd組合可有效干預(yù)光感受器細(xì)胞死亡及視網(wǎng)膜退行性病變的發(fā)生， 對視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)起到顯著的保護效應(yīng)。
[0044] -、方法
[0045] 1.藥物
[0046] 人參皂苷Rbl和人參皂苷RcL人參皂苷Rbl購自上海源葉生物科技有限公司， 41753-43-9，Lot#H02J6X4,純度彡98%。人參皂苷Rd購自上海源葉生物科技有限公司， 52705-93-8，Lot#H02J6X2，純度彡 98 %。
[0047] 2.動物模型
[0048]采用4-6周齡雌性Balb/c小鼠（斯萊克，上海）進行試驗。小鼠隨機分為正常對照 組、光損傷模型對照組、人參皂苷Rbl和Rd組合處理，人參皂苷Rb和Rd劑量分別為65mg/kg和 22.5mg/kg體重，光照前30分鐘腹腔注射。光照刺激將采用彌散白色冷熒光燈，光照條件設(shè) 置為10,000Lux，持續(xù)30分鐘。光照7天后，分別進行視網(wǎng)膜形態(tài)分析。
[0049] 3.視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)分析
[0050] 藥物治療及光照后第7天，1%戊巴比妥鈉麻醉小鼠，托吡卡胺散瞳后，采用小動物 0CT(Phoenix Research Labs)分別對各組小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)進行觀察和比較。
[00511 4 .ONL厚度測定分析
[0052] OCT成像后，從ONH(視神經(jīng)乳頭）出發(fā)，對內(nèi)側(cè)及外側(cè)視網(wǎng)膜ONL厚度以500μπι為間 距進行測量，對各組視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)保護的效應(yīng)進行定量分析。
[0053] 5.視網(wǎng)膜組織病理
[0054] 在OCT成像后7天，處死小鼠，取眼球，以4%多聚甲醛固定。固定的眼球組織進行石 蠟包埋和切片處理。石蠟切片厚度為4μπι，用于進一步的Η&Ε染色和免疫組織化學(xué)染色，包括 Rhodopsin標(biāo)記視錐細(xì)胞、opsin M標(biāo)記視桿細(xì)胞，DAPI進行細(xì)胞核標(biāo)記。在光照后3天，處死 小鼠，取眼球，顯微鏡下剔除角膜及晶狀體，將含視網(wǎng)膜的眼球組織以4%多聚甲醛固定。固 定的眼球組織進行冰凍切片處理。冰凍組織切片厚度為12μπι，用于進一步的免疫組織化學(xué) 染色，包括GFAP標(biāo)記Mill Ier膠質(zhì)細(xì)胞、Ibal標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞，DAPI進行細(xì)胞核標(biāo)記。
[0055] 6.原位氧化應(yīng)激水平分析
[0056]藥物治療及光照后1天，各組小鼠分別腹腔注射超氧化物陰離子熒光探針DHE，2小 時候處死小鼠，取眼球，分離并剔除角膜及晶狀體，將含視網(wǎng)膜部分進行4%多聚甲醛固定。 固定的眼球組織進行冰凍切片處理，冰凍組織切片厚度為12μπι，用于進一步分析視網(wǎng)膜各 層的紅色熒光。
[0057] 7.統(tǒng)計分析
[0058] 數(shù)據(jù)表達(dá)為means土S.E，數(shù)據(jù)分析采用indepedent sample t test方法。ρ〈0·05 定義為統(tǒng)計學(xué)顯著差異。
[0059] 二、結(jié)果
[0060] 1.白光照射誘發(fā)小鼠視網(wǎng)膜嚴(yán)重?fù)p害
[0061]白光照射后7天，采用OCT對視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)進行成像。如圖1所示，白光照射誘發(fā)嚴(yán)重 的以光感受器細(xì)胞損傷為主要病理表現(xiàn)的視網(wǎng)膜退行性改變，主要表現(xiàn)為白光照射后7天 ONL嚴(yán)重?fù)p傷。
[0062] 2.人參皂苷Rbl和Rd組合對視網(wǎng)膜保護效應(yīng)
[0063]白光照射前30分鐘，小鼠接受溶劑或人參皂苷Rbl和Rd組合治療，人參皂苷Rbl和 Rd劑量分別為65mg/kg和22.5mg/kg體重，體積為50μ1，腹腔注射。光照后7天，采用OCT進行 視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)分析。如圖1所示，人參皂苷Rbl和Rd組合治療均顯著抑制了視網(wǎng)膜光損傷的發(fā) 生，主要表現(xiàn)為ONL形態(tài)維持完好，對ONL厚度的定量分析數(shù)據(jù)（圖2)表明，與未接受光照的 正常小鼠視網(wǎng)膜相比較，光照導(dǎo)致視網(wǎng)膜ONL厚度嚴(yán)重降低(*ρ〈0.05)，而人參皂苷Rbl和Rd 組合治療對視網(wǎng)膜ONL起到了顯著的保護，其各自O(shè)NL厚度接近未接受光照的正常小鼠視網(wǎng) 膜ONL厚度(*光損傷模型組與正常對照組比較，ρ〈0.05;#人參皂苷Rbl和Rd組合與光損傷模 型組比較，Ρ〈〇.05)。組織病理學(xué)研究結(jié)果（圖3)表明，未接受光照的正常小鼠視網(wǎng)膜各層結(jié) 構(gòu)完整，而光損傷小鼠表現(xiàn)為ONL嚴(yán)重減少，人參皂苷Rbl和Rd組合治療組小鼠的視網(wǎng)膜各 層結(jié)構(gòu)與未接受光照組相似。進一步的免疫組織化學(xué)研究結(jié)果（圖4)表明，DAPI標(biāo)記的ONL 在光損傷小鼠視網(wǎng)膜嚴(yán)重缺失，與正常對照相比，Rhodops in、ops in M僅見殘余表達(dá)(*ρ〈 0.05)。人參皂苷Rbl和Rd組合治療組Rhodopsin、opsin M表達(dá)模式與正常對照組相似，ONL 未見明顯損傷(Rhodopsin:紅色，opsin M:紅色，DAPI:藍(lán)色）。采用超氧化物陰離子銀光探 針DHE進行原位氧化應(yīng)激水平分析，如圖5所示，未接受光照的正常對照小鼠視網(wǎng)膜各層未 見紅色熒光信號，光損傷小鼠視網(wǎng)膜的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)和ONL可見顯著增強的紅 色熒光信號，人參皂苷Rbl和Rd組合治療組小鼠僅在RPE可見微弱的紅色熒光信號。GFAP標(biāo) 記Muller膠質(zhì)細(xì)胞在未光照的正常對照小鼠中主要表達(dá)在神經(jīng)纖維層（圖6)，光損傷模型 小鼠視網(wǎng)膜則表現(xiàn)為ONL、IPL和INL均有明顯GFAP表達(dá)，人參皂苷Rb 1和Rd組合治療組的 GFAP表達(dá)模式與正常對照組相似；Ibal標(biāo)記的小膠質(zhì)細(xì)胞在正常小鼠視網(wǎng)膜主要表達(dá)于 IPL(圖6)光損傷模型的視網(wǎng)膜在0NL、0PL均見大量的陽性Ibal表達(dá)，而人參皂苷Rbl和Rd組 合治療組的Ibal表達(dá)模式與正常對照組相似。
[0064]綜上所述，通過采用OCT影像學(xué)及視網(wǎng)膜組織病理學(xué)手段對視網(wǎng)膜光損傷模型的 研究提示人參皂苷Rbl和Rd組合對視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的死亡、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及光 感受細(xì)胞氧化應(yīng)激、視網(wǎng)膜損傷相關(guān)免疫炎癥反應(yīng)極其導(dǎo)致的視網(wǎng)膜退行性病變的發(fā)生具 有顯著的防治作用。
[0065]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種預(yù)防和/或治療視網(wǎng)膜退行性病變的藥物組合物，其特征在于，所述藥物由下列 原料藥制備而成:人參皂巧肺1、人參皂巧Rd;所述人參皂巧Rbl、人參皂巧Rd的結(jié)構(gòu)式分別 如式I及式II所示；2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述預(yù)防和/或治療視網(wǎng)膜退行性病變的藥物組合物，其特征在于， 所述藥物由下列原料藥制備而成:人參皂巧肺1、人參皂巧Rd，所述人參皂巧Rbl與人參皂巧 Rd質(zhì)量比為26:5-10;或所述人參皂巧肺1與人參皂巧Rd質(zhì)量比為26: 9。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述預(yù)防和/或治療視網(wǎng)膜退行性病變的藥物組合物，其特征在于， 所述藥物組合物包含治療有效量的權(quán)利要求1-2所述的藥物組合物、及其藥學(xué)上可接受的 賦形劑、載體或稀釋劑;所述藥學(xué)上可接受的載體包括眼用溶劑的附加劑、注射用附加劑、 片劑用附加劑、表面活性劑和穩(wěn)定劑;所述人參皂巧Rbl和Rd組合為所述藥物組合物的主要 活性成分。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述預(yù)防和/或治療視網(wǎng)膜退行性病變的藥物組合物，其特征在于， 所述藥物組合物還包括其他治療眼部疾病的藥物。5. 權(quán)利要求1-4任一所述的藥物組合物在制藥中的用途，其特征在于，所述藥物用于治 療和/或預(yù)防視網(wǎng)膜退行性病變，所述視網(wǎng)膜退行性病變是W視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞死亡為 核屯、病理，或有視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞或光感受器細(xì)胞的氧化應(yīng)激參與。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述視網(wǎng)膜退行性病變選自：年齡相關(guān)性 黃斑變性、Stargar化病、視錐-視桿細(xì)胞營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜色素變性和糖尿病視網(wǎng)膜病變。7. 權(quán)利要求1-4任一所述的藥物組合物在制藥或試劑中的用途，其特征在于，所述藥物 或試劑用于保護視網(wǎng)膜的形態(tài)、結(jié)構(gòu)或功能。8. 權(quán)利要求1-4任一所述的藥物組合物在制藥或試劑中的用途，其特征在于，所述藥物 或試劑用于抑制視網(wǎng)膜光損傷。9. 權(quán)利要求1-4任一所述的藥物組合物在制藥或試劑中的用途，其特征在于，所述藥物 或試劑用于： (1) 用于預(yù)防或治療視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞死亡； (2) 用于預(yù)防或治療視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞或光感受器細(xì)胞過度氧化應(yīng)激； (3) 用于維持視網(wǎng)膜外核層形態(tài)； (4) 用于防止視網(wǎng)膜外核層厚度降低； (5) 用于抑制視網(wǎng)膜損傷相關(guān)免疫炎癥反應(yīng)。10.根據(jù)權(quán)利要求5-9所述的用途，其特征在于，所述藥物組合物作為單一成分或與其 他藥學(xué)上可接受的成分構(gòu)成組合物用W制藥或試劑。
【文檔編號】A61P37/02GK106074585SQ201610494685
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月29日
【發(fā)明人】陳瑜, 張騰, 卞敏娟, 崔金剛, 王培偉, 于心同, 李黎, 杜宵燁, 丁李立強
【申請人】上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院