一種制備高純度丹參酮iia和丹參酮i的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物有效成分提取領(lǐng)域，具體地涉及一種高純度丹參酮的分離純化方法。
技術(shù)背景
[0002]丹參的化學(xué)成分主要有兩大類，脂溶性成分屬醌、酮型結(jié)構(gòu)的有:丹參酮，隱丹參酮，異丹參酮，異隱丹參酮，羥基丹參酮，丹參酸甲酯，亞甲基丹參醌，二氫丹參酮，丹參新醌A、B、C、D，二氫異丹參酮，新隱丹參酮等。水溶性酚性酸化合物有:丹參素、丹參酚酸、丹參酚酸六4、(:、03、6;迷迭香酸，迷迭香酸甲酯，紫草酸草酸單甲脂，紫草酸二甲酯，紫草酸乙酯，紫草酸B，原兒茶醛，咖啡酸，異阿魏酸等。《中國藥典》2010版中藥材臨床標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了丹參的功能主治標(biāo)準(zhǔn):活血祛瘀,通經(jīng)止痛,清心除煩，涼血消癰。
[0003]在臨床上，丹參提取物廣泛應(yīng)用于治療心血管病的中成藥制劑，其中丹參酮IIA對心肌具有修復(fù)作用，可減輕缺氧引起的心肌損傷，同時(shí)改善心肌收縮力，促進(jìn)心肌再生。此外還具有抑制ADP誘導(dǎo)血小板凝集、抑制血小板TXA2的合成、釋放縮血管物質(zhì)及促進(jìn)纖維蛋白降解等作用，可降低冠心病、腦缺血、中風(fēng)及心肌梗塞病人的全血和血漿粘度，減少紅細(xì)胞壓積，通過抗凝降粘的作用使患者血液流變學(xué)指標(biāo)恢復(fù)正常。
[0004]傳統(tǒng)的丹參酮提取工藝為:取丹參，切成小段，加水于80°C提取兩次，合并提取液，濾過，濾液于60°C減壓濃縮至相對密度為1.18?1.22(50°C )的清膏，放冷，加乙醇使含醇量為70%，靜置12小時(shí)，取上清液，減壓回收乙醇，并濃縮至稠膏，干燥，即得。該工藝制備的丹參酮為酮類的混合物，丹參酮ΠΑ、丹參酮I的的純度較低。
[0005]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，制備出高純度的丹參酮，本發(fā)明提供了一種采用Sephadex LH-20分離介質(zhì)的層析分離純化技術(shù)。Sephadex LH20的分離原理以凝膠過濾作用為主，兼具反相分配的作用，特點(diǎn)為:1、適合用有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子，可以非常經(jīng)濟(jì)地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物2、結(jié)合凝膠過濾、分配色譜及吸附性層析于一身，分離結(jié)構(gòu)非常相近的分子3、載量可高達(dá)300mg樣品/ml凝膠，極少需要再生，分離效果可保持十幾年不變。本發(fā)明采用Sephadex LH-20層析柱對丹參酮粗品進(jìn)行分離純化，通過優(yōu)選分離條件，純化出丹參酮IIA、丹參酮I單體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供了一種工藝簡單、成本低的丹參酮IIA、丹參酮I提取和純化方法。
[0007]本發(fā)明的丹參酮提取和純化方法是以丹參為原料，采用95%乙醇或無水乙醇作為提取劑，提取出丹參酮類組分，再采用Sephadex LH20層析柱對其進(jìn)行純化，制備出丹參酮IIA、丹參酮I單體。
[0008]本發(fā)明所述原料為丹參(拉丁學(xué)名Salvia milt1rrhiza Bunge,又名赤參，紫丹參，紅根等)的根莖。
[0009]本發(fā)明提取及純化方法如下:
[0010]1.原材料預(yù)處理:取干燥后的丹參根，除去其中的可見雜物后，用粉碎機(jī)粉碎，過40目篩備用。
[0011]2.醇提:將步驟1的丹參根粉置于提取罐中，加入10?20倍重量的95%乙醇或無水乙醇，于55?85°C浸提1?4小時(shí)，重復(fù)浸提2?4次。
[0012]3.過濾濃縮:將步驟2的浸提液用濾布過濾，減壓蒸餾回收乙醇，將浸提液濃縮至稠膏狀。
[0013]4.Sephadex LH20層析分離:用相當(dāng)于0.5?2倍丹參根粉重量的甲醇溶解步驟3制取的稠膏，用濾布過濾除去不溶性雜質(zhì)后，以10?50mL/min的流速通過Sephadex-LH 20層析柱。上樣結(jié)束后，用甲醇/異丙醇混合溶液進(jìn)行洗脫，流速為15?60mL/min。甲醇:異丙醇:水的比例=5?7: 1?3: 2?4。分別收集橘紅色洗脫液(含丹參酮IIA)和棕紅色洗脫液(含丹參酮I)。
[0014]5.將步驟4中收集的洗脫液于40?65°C減壓蒸餾濃縮成濃縮液，采用噴霧干燥的方法制成粉末狀成品。噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度為110?135°C，出風(fēng)口溫度為95?115。。。
[0015]本發(fā)明采用Sephadex LH20柱層析分離技術(shù)，經(jīng)過發(fā)明人的多次實(shí)驗(yàn),對流速、洗脫液所用溶劑、洗脫液所用混合溶劑的比例、噴霧干燥條件等工藝條件不斷進(jìn)行優(yōu)化，使得本發(fā)明的方法具有以下優(yōu)點(diǎn)和積極的效果:
[0016](1)相對于傳統(tǒng)方法，大幅提高了丹參酮IIA和丹參酮I的提取效率和純度，并且最大程度地保留了有效成分的活性；
[0017](2)提取過程節(jié)能環(huán)保，能耗低；
[0018](3)所用的分離介質(zhì)Sephadex LH20，具有操作簡單、容易再生、成本低等優(yōu)勢，非常適于大規(guī)模生產(chǎn)；
[0019](4)可同時(shí)產(chǎn)生丹參酮IIA和丹參酮I兩種產(chǎn)品，純度均達(dá)到90%以上，可以作為保健品和藥品的原料，適應(yīng)市場的不同需要。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面以具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，具體實(shí)施例僅是對本發(fā)明做出更清楚的說明，而不是對本發(fā)明的限制。
[0021]實(shí)施例1:
[0022]將干燥的丹參根磨成粉，按照1份丹參根粉:10份95 %乙醇的比例加入95 %乙醇，在65°C加熱保溫回流4h，過濾得到濾液，再重復(fù)回流步驟兩次，合并三次回流得到的濾液，減壓蒸餾回收乙醇，得到丹參提取物浸膏。
[0023]用相當(dāng)于1份丹參根粉重量的甲醇溶解上述浸膏，過濾除去不溶雜質(zhì)后，以10mL/min的流速通過Sephadex-LH 20層析柱。用甲醇/異丙醇混合溶液進(jìn)行洗脫(甲醇:異丙醇:水=6: 1: 3)，流速為15mL/min。分別收集橘紅色洗脫液(含丹參酮IIA)和棕紅色洗脫液(含丹參酮I)。
[0024]將上述洗脫液于60°C減壓濃縮成濃縮液，采用噴霧干燥制成粉末狀成品。噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度為120°C，出風(fēng)口溫度為110°C。
[0025]HPLC檢測條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(75: 25)為流動相；檢測波長為270nm ;流速為lmL/min ;檢測溫度為室溫。經(jīng)檢測，本實(shí)施例中制備的丹參酮IIA純度為94.7% ;丹參酮I純度為93.5%。
[0026]實(shí)施例2:
[0027]將干燥的丹參根磨成粉，在超聲波逆流提取裝置中于65°C進(jìn)行提取，提取溶劑為95%乙醇。將提取液減壓蒸餾回收乙醇后得到丹參提取物浸膏。
[0028]用相當(dāng)于1份丹參根粉重量的甲醇溶解上述浸膏，過濾除去不溶雜質(zhì)后，以10mL/min的流速通過Sephadex-LH 20層析柱。用甲醇/異丙醇混合溶液進(jìn)行洗脫(甲醇:異丙醇:水=7: 1: 2)，流速為15mL/min。分別收集橘紅色洗脫液(含丹參酮IIA)和棕紅色洗脫液(含丹參酮I)。
[0029]將上述洗脫液于60°C減壓濃縮成濃縮液，采用噴霧干燥制成粉末狀成品。噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度為120°C，出風(fēng)口溫度為110°C。
[0030]HPLC檢測條件為同實(shí)施例1。經(jīng)檢測，本實(shí)施例中制備的丹參酮IIA純度為95.2% ;丹參酮I純度為94.1%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種高效提取丹參酮IIA和丹參酮I方法，其包括以丹參為原料，采用醇提法制備出丹參酮混合物，再采用Sephadex LH20層析進(jìn)一步分離，使用甲醇/異丙醇混合洗脫液進(jìn)行洗脫，收集丹參酮II A洗脫液和丹參酮I洗脫液，經(jīng)過濃縮和噴霧干燥工藝后，得到精制的丹參酮ΠΑ和丹參酮I。2.如權(quán)利要求1所述的高效提取丹參酮IIA和丹參酮I方法，醇提法所用的試劑為95%乙醇或無水乙醇。3.如權(quán)利要求1所述的高效提取丹參酮IIA和丹參酮I方法，層析分離介質(zhì)為Sephadex LH20。4.如權(quán)利要求1所述的高效提取丹參酮IIA和丹參酮I方法，甲醇/異丙醇混合洗脫液的比例為甲醇:異丙醇:水的比例=5?7: 1?3: 2?4。5.如權(quán)利要求1所述的高效提取丹參酮IIA和丹參酮I方法，層析分離上樣時(shí)流速為10?50mL/min,洗脫時(shí)流速為15?60mL/min。6.如權(quán)利要求1所述的高效提取丹參酮IIA和丹參酮I方法，噴霧干燥時(shí)進(jìn)風(fēng)口溫度為110?135°C，出風(fēng)口溫度為95?115°C。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種工藝簡單且成本低的丹參酮IIA、丹參酮I提取和純化方法。其中以丹參根為原料，首先采用醇提法制備出丹參酮混合物，再采用Sephadex？LH20層析進(jìn)一步分離，使用甲醇/異丙醇混合溶液進(jìn)行洗脫，收集丹參酮IIA洗脫液和丹參酮I洗脫液，經(jīng)過濃縮和噴霧干燥工藝后，得到精制的丹參酮IIA和丹參酮I，純度可達(dá)90％以上。本發(fā)明的方法最大程度地保留了有效成分的活性，顯著提高提取效率，適合大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。
【IPC分類】C07J73/00
【公開號】CN105399796
【申請?zhí)枴緾N201410468943
【發(fā)明人】胡瑋, 王玉海
【申請人】寧波潤沃生物科技有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2014年9月11日