(s)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1h-茚-2-羧酸甲酯的生物制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種(S)?5?氯?2,3?二氫?2?羥基?1?氧代?1H?茚?2?羧酸甲酯的生物制備方法，以消旋體5?氯?2,3?二氫?2?羥基?1?氧代?1H?茚?2?羧酸甲酯為底物，該底物在生物酶的存在下，手性水解拆分獲得(S)?5?氯?2,3?二氫?2?羥基?1?氧代?1H?茚?2?羧酸甲酯，所述的生物酶為水解酶，所述反應(yīng)在pH為5~9、溫度為10~45℃的水相緩沖溶液中進行，其中，在起始反應(yīng)體系中，所述底物5?氯?2,3?二氫?2?羥基?1?氧代?1H?茚?2?羧酸甲酯的濃度為100 mg/mL。本發(fā)明首次公開了利用生物酶在水相中進行消旋體5?氯?2,3?二氫?2?羥基?1?氧代?1H?茚?2?羧酸甲酯的手性拆分反應(yīng)，整個反應(yīng)未有大量有機溶劑和手性拆分試劑的使用，過程簡單高效，具有良好的經(jīng)濟性和環(huán)境友好性。
【專利說明】
(S )-5-氯-2，3-二氨-2-哲基-1 -氧代-川-節(jié)-2-錢酸甲醋的生 物制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物化工技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及（S)-5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋的生物制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 據(jù)世界糧農(nóng)組織統(tǒng)計，由于病蟲草害的侵擾給農(nóng)作物造成的損失相當(dāng)于世界每年 作物產(chǎn)量的=分之一。目前我國農(nóng)藥產(chǎn)品W有機憐、氨基甲酸醋等高毒農(nóng)藥為主，開發(fā)高 效、低毒、對環(huán)境安全的綠色殺蟲劑迫在眉睫。
[0003] 嗯二嗦類殺蟲劑是繼除蟲菊醋、化蟲嘟等殺蟲劑之后人們發(fā)現(xiàn)的具有劃時代意義 的新型殺蟲劑。巧蟲威（indoxacarb)是美國杜邦公司開發(fā)的新型嗯二嗦類(oxadiazine)殺 蟲劑，商品名Ammate/Avatar，為鋼通道抑制廣譜殺蟲劑，對幾乎所有的鱗翅目害蟲均具有 殺滅能力，具有殺蟲活性高、環(huán)境相容性好、對哺乳動物毒性低，對鳥類、魚類W及益蟲安全 的優(yōu)點，是替代高毒有機憐殺蟲劑的理想品種。
[0004]
[0005] 巧蟲威的制備方法的關(guān)鍵是獲得其手性中間體(S)-5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧 代-IH-巧-2-簇酸甲醋（1)。市場中常見的5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲 醋一般是其消旋體(2)，由于其R-構(gòu)型異構(gòu)體沒有殺蟲活性，導(dǎo)致施藥量高;巧蟲威的含量 是WS-構(gòu)型產(chǎn)物計算的，導(dǎo)致混旋的產(chǎn)品經(jīng)濟性也較差。因此，從化合物2中獲得較純S-構(gòu) 型中間體1具有重要的意義。目前除了重結(jié)晶方法有過報道(CN 201410465250)，尚無生物 法對其講斤巧A的韋'法井。
[0006]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種（S)-5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲 醋的生物制備方法。
[000引為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種(S)-5-氯-2,3-二氨-2-?基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋的生物制備方法，W消旋體5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋為底物，該底物在生物酶的存在下，手性水解拆分獲得(S) -5-氯-2，3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋，所述的生物酶為水解酶，所述反應(yīng)在抑為5~9、溫度為 10~45°C的水相緩沖溶液中進行，其中，在起始反應(yīng)體系中，所述底物5-氯-2,3-二氨-2-徑 基-1-氧代-IH-邱-2-簇酸甲醋的濃度為lOOmg/mL。
[0009] 優(yōu)選地，所述的水解酶為購自蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的牌號為EW1511的 水解酶。
[0010] 優(yōu)選地，所述的水解酶與底物5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋 的質(zhì)量比為1:100。
[0011] 優(yōu)選地，所述反應(yīng)在助溶劑條件下進行，所述的助溶劑為正下醇。
[0012] 進一步優(yōu)選地，起始反應(yīng)體系中，所述的助溶劑的投料體積為反應(yīng)總體積的1~ 20%。
[0013] 優(yōu)選地，所述的水相緩沖溶液為憐酸鹽緩沖溶液。
[0014] 優(yōu)選地，具體實施過程如下：在反應(yīng)容器中，依次加入所述的水相緩沖溶液、底物 5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋，攬拌均勻后，加入水解酶，在10~45°C 的溫度條件下震蕩反應(yīng)，HPLC檢測反應(yīng)進程，待反應(yīng)完全后，過濾除酶并用等體積乙酸乙醋 進行多次萃取，合并有機相、脫去溶劑后得到（S)-5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋產(chǎn)品。
[0015] 由于上述技術(shù)方案的運用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點：本發(fā)明首次公 開了利用生物酶在水相中進行消旋體5-氯-2,3-二氨-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋的手性拆 分反應(yīng)得到(S)-5-氯-2，3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋，整個反應(yīng)物無大量有 機溶劑和手性拆分試劑的使用，制備過程簡單高效，具有良好的經(jīng)濟性和環(huán)境友好性。
【附圖說明】
[0016] 附圖1為實施例1中冊LC監(jiān)測底物5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸 甲醋的反應(yīng)變化圖。
【具體實施方式】
[0017] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細的說明，但本發(fā)明并不限于W下實施 例。實施例中采用的實施條件可W根據(jù)具體使用的不同要求做進一步調(diào)整，未注明的實施 條件為常規(guī)實驗中的條件。
[001引實施例1
[0019] 在IOOmL反應(yīng)容器中，依次加入47.5mL IOOmM pH 7.0的憐酸鹽緩沖溶液，加入底 物5-氯-2，3-二氨-2-徑基-1 -氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋5g，正下醇2.5mL，攬拌均勻后，加入 水解酶(牌號為EW1511，購自蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司）0.05g，30°C下震蕩反應(yīng)2小時， HPLC檢測底物ee值為99%，R-構(gòu)型和S-構(gòu)型在底物中的比例變化如附圖1。過濾除酶后等體 積乙酸乙醋萃取3次，合并有機相，脫去溶劑得到產(chǎn)品（S)-5-氯-2,3-二氨-2-徑基-1-氧代-IH-巧-2-簇酸甲醋2.4g，純度98%，ee值99%。
[0020]上述實施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術(shù)的人 ±能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并加 W實施，并不能W此限制本發(fā)明的保護范圍，凡根據(jù)本發(fā)明 精神實質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種(S)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的生物制備方法，其特 征在于，以消旋體5-氯-2，3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯為底物，該底物在生 物酶的存在下，手性水解拆分獲得(S)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1!1-茚-2-羧酸甲 酯，所述的生物酶為水解酶，所述反應(yīng)在pH為5~9、溫度為10~45°C的水相緩沖溶液中進行， 其中，在起始反應(yīng)體系中，所述底物5-氯-2，3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的 濃度為100 mg/mL。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的（S)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的生 物制備方法，其特征在于，所述的水解酶為購自蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的牌號為 EW1511的水解酶。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的（S)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯 的生物制備方法，其特征在于，所述的水解酶與底物5-氯-2，3_二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的質(zhì)量比為1:100。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的（S)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的生 物制備方法，其特征在于，所述反應(yīng)在助溶劑條件下進行，所述的助溶劑為正丁醇。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的（S)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的生 物制備方法，其特征在于，起始反應(yīng)體系中，所述的助溶劑的投料體積為反應(yīng)總體積的1~ 20% 〇6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的（S)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的生 物制備方法，其特征在于，所述的水相緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的（S)-5-氯-2,3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯的生 物制備方法，其特征在于，具體實施過程如下:在反應(yīng)容器中，依次加入所述的水相緩沖溶 液、底物5-氯-2，3-二氫-2-羥基-1-氧代-1H-茚-2-羧酸甲酯，攪拌均勻后，加入水解酶，在 10~45°C的溫度條件下震蕩反應(yīng)，HPLC檢測反應(yīng)進程，待反應(yīng)完全后，過濾除酶并用等體積 乙酸乙酯進行多次萃取，合并有機相、脫去溶劑后得到（S)_5_氯-2，3-二氫_2_羥基-1-氧 代-1H-茚-2-羧酸甲酯產(chǎn)品。
【文檔編號】C12P41/00GK105838772SQ201610361988
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】陶軍華, 楊鍇
【申請人】蘇州漢酶生物技術(shù)有限公司