本發(fā)明涉及疾病檢測技術(shù)領(lǐng)域，更具體的是涉及一種基于彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒制備方法。

背景技術(shù)：

目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。全球乳腺癌發(fā)病率自20世紀(jì)70年代末開始一直呈上升趨勢。美國8名婦女一生中就會(huì)有1人患乳腺癌。據(jù)國家癌癥中心和衛(wèi)生部疾病預(yù)防控制局2012年公布的2009年乳腺癌發(fā)病數(shù)據(jù)顯示：全國腫瘤登記地區(qū)乳腺癌發(fā)病率位居女性惡性腫瘤的第1位，女性乳腺癌發(fā)病率(粗率)全國合計(jì)為42.55/10萬，城市為51.91/10萬，農(nóng)村為23.12/10萬。乳腺癌已成為當(dāng)前社會(huì)的重大公共衛(wèi)生問題。自20世紀(jì)90年代全球乳腺癌死亡率呈現(xiàn)出下降趨勢；究其原因，一是乳腺癌篩查工作的開展，使早期病例的比例增加；二是乳腺癌綜合治療的開展，提高了療效。CA15-3是乳腺癌的最重要的特異性標(biāo)志物。30％-50％的乳腺癌患者的CA15-3明顯升高，其含量的變化與治療效果密切相關(guān)，是乳腺癌患者診斷和監(jiān)測術(shù)后復(fù)發(fā)、觀察療效的最佳指標(biāo)。CA15-3動(dòng)態(tài)測定有助于II期和III期乳腺癌病人治療后復(fù)發(fā)的早期發(fā)現(xiàn)；當(dāng)CA15-3大于100U/ml時(shí)，可認(rèn)為有轉(zhuǎn)移性病變。

免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique)又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性，所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時(shí)，只要知道其中的一個(gè)因素，就可以查出另一個(gè)因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體(或抗原)上，與其相應(yīng)的抗原(或抗體)結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

彈性蛋白酶(Elastase)熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110是一種雙酰胺衍生物的羅丹明110(Rhodamine110)分子探針，是一個(gè)敏感的和有選擇性的測定蛋白酶在溶液中或在活細(xì)胞內(nèi)底物。這些熒光底物含有一種氨基酸或肽共價(jià)連接到每個(gè)Rhodamine110的氨基，酶裂解后，非熒光雙酰胺底物首先轉(zhuǎn)化為弱熒光單酰胺，然后轉(zhuǎn)化為強(qiáng)熒光的Rhodamine110，熒光會(huì)進(jìn)一步增加。由于Rhodamine110具有較大的消光系數(shù)，所以實(shí)驗(yàn)的信噪比很高。此外，相比于普通的熒光素而言，Rhodamine110的熒光在pH3-9之間會(huì)保持穩(wěn)定。目前熒光檢測因具有優(yōu)異的光學(xué)性質(zhì)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于示蹤、成像以及標(biāo)記等方面，而ELISA則因?yàn)樗撵`敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)在檢測領(lǐng)域處于特殊重要的地位。所以本文擬研制基于彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒，對(duì)乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153進(jìn)行檢測。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于蛋白標(biāo)志物在腫瘤檢測中的重要地位、熒光檢測獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì)以及酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)的優(yōu)勢。我們將結(jié)合酶聯(lián)免疫檢測和熒光檢測兩種技術(shù)，利用彈性蛋白酶和腫瘤標(biāo)志物相應(yīng)抗體Ab₂制得檢測探針。探針、腫瘤標(biāo)志物和包埋在酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒的另一種腫瘤標(biāo)志物抗體Ab₁通過抗體抗原之間的作用，形成一種類似夾心的結(jié)構(gòu)，最后通過酶和熒光底物的作用產(chǎn)生熒光，對(duì)CA153這種乳腺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定性定量的檢測，建立蛋白標(biāo)志物檢測的新方法，極大程度提高了檢測靈敏度。

本發(fā)明制備的基于彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征是選用彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110特異性降解產(chǎn)生的熒光對(duì)乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153進(jìn)行定量檢測，其結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種基于彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒；其步驟如下：

1)將新配制的高碘酸鈉NalO₄溶液加入到彈性蛋白酶Elastase溶液中，室溫下避光攪拌后，用醋酸鹽緩沖液透析過夜處理，通過加入碳酸鹽緩沖液使體系pH達(dá)到9.0～9.3，立即加入CA153標(biāo)記抗體Ab₂，室溫下避光攪拌后加入少量硼氫化鈉NaBH₄充分反應(yīng)后用PBS緩沖液透析過夜，得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂；

2)將CA153包被抗體Ab₁加入96孔酶標(biāo)板，靜置過夜處理后用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入BSA封閉處理后再次用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，之后加入標(biāo)準(zhǔn)CA153抗原或病人樣本緩慢搖晃孵育，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入上述酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₁，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，最后加入胰蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110，用熒光酶標(biāo)儀讀取96孔酶標(biāo)板熒光強(qiáng)度值。

所述醋酸鹽緩沖液是0.01M pH4.4的緩沖液；碳酸鹽緩沖液是0.2M pH9.5的緩沖液；PBS緩沖液是0.15M pH7.4的緩沖液。

所述彈性蛋白酶：高碘酸鈉質(zhì)量比為1:0.8～1.2；彈性蛋白酶：CA153標(biāo)記抗體質(zhì)量比為1:1～5；彈性蛋白酶：硼氫化鈉質(zhì)量比為15:1。

所述CA153包被抗體Ab₁濃度為10～50μg/mL。

所述洗滌緩沖液是含有0.05～0.5％Tween-20的0.01M pH7.4的PBS緩沖液。

所述檢測原理是根據(jù)胰蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110降解產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度值和CA153標(biāo)準(zhǔn)抗原濃度之間的關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，定性定量檢測卵巢癌腫瘤標(biāo)志物CA125。

通過高碘酸鈉NalO₄作用將CA153記抗體Ab₂和彈性蛋白酶Elastase連接，得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂。將CA153包被抗體Ab1加入96孔酶標(biāo)板，4℃過夜后用洗滌緩沖液洗滌96孔酶標(biāo)板，加入BSA 37℃封閉處理后用洗滌緩沖液洗滌96孔酶標(biāo)板，在96孔酶標(biāo)板加入待檢樣品37℃下反應(yīng)后用洗滌緩沖液洗滌96孔酶標(biāo)板，加入上述Elastase-Ab₂檢測探針37℃下反應(yīng)后用洗滌緩沖液洗滌96孔酶標(biāo)板，加入彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110，最后用熒光酶標(biāo)儀讀數(shù)。如果檢測樣品有CA153抗原Ag存在，探針Elastase-Ab₂、CA153抗原Ag和包埋在96孔酶標(biāo)板上的CA153包被抗體Ab₁通過抗體抗原之間的作用，形成一種類似夾心的結(jié)構(gòu)Elastase-Ab₂-Ag-Ab₁，此時(shí)彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110在酶的作用下降解產(chǎn)生熒光；如果檢測樣品沒有CA153抗原Ag存在，則96孔酶標(biāo)板的檢測探針Elastase-Ab₂將被洗滌緩沖液清洗，此時(shí)彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110不會(huì)降解，沒有熒光出現(xiàn)。在96孔酶標(biāo)板上加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)CA153抗原，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，定性定量檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153。

本發(fā)明制備的基于彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒優(yōu)勢在于：

1.采用彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110這種具有優(yōu)異的光學(xué)性質(zhì)的雙酰胺衍生物的羅丹明110(R110)分子探針，由于Rhodamine110具有較大的消光系數(shù)，所以實(shí)驗(yàn)的信噪比很高。此外，相比于普通的熒光素而言，Rhodamine110的熒光在pH3-9之間會(huì)保持穩(wěn)定。

2.采用酶聯(lián)免疫檢測ELISA這種具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)的傳統(tǒng)檢測技術(shù)，有利于提高檢測效率。

3.采用高碘酸鈉NalO₄作用將CA153記抗體Ab₂和彈性蛋白酶Elastase連接得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂，夾心結(jié)構(gòu)降解熒光底物產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度，定性定量檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153，有效地降低了檢測熒光背景。

如圖1所示，彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110酶裂解后，非熒光雙酰胺底物率先轉(zhuǎn)化為一對(duì)弱熒光的單酰胺，然后轉(zhuǎn)化為強(qiáng)熒光的Rhodamine110，熒光進(jìn)一步增加，實(shí)現(xiàn)超靈敏檢測。如圖2所示，根據(jù)加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)CA153抗原所得熒光強(qiáng)度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線可知本發(fā)明制備的彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒檢測靈敏度較高，達(dá)到1*10^-10U/mL；圖3根據(jù)加入不同抗原，可知本發(fā)明制備的彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒特異性很好。

附圖說明

圖1本發(fā)明制備的基于彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒底物降解示意圖。

圖2本發(fā)明制備的基于彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線及紫外照片。

圖3本發(fā)明制備的基于彈性蛋白酶熒光底物檢測乳腺癌腫瘤標(biāo)志物CA153的酶聯(lián)免疫試劑盒特異性曲線及紫外照片。

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)施案例中將對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述，但本發(fā)明不限于此。

實(shí)施案例1：

1)將新配制的0.2mL高碘酸鈉NalO₄溶液(21.39mg/mL)加入到1mL彈性蛋白酶Elastase溶液(5mg/mL)中，室溫下避光攪拌20min后，用1mM PH4.4醋酸鹽緩沖液透析過夜處理，通過加入20μL 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液使體系pH達(dá)到9.0～9.3，立即加入10mg CA153標(biāo)記抗體Ab₂，室溫下避光攪拌2h后加入0.1mL硼氫化鈉NaBH₄(4mg/mL)充分反應(yīng)后用0.15M PH7.4PBS緩沖液透析過夜，得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂；

2)將100μL CA153包被抗體Ab₁(24μg/mL)加入96孔酶標(biāo)板，4℃靜置過夜處理后用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入300μL BSA(10mg/mL)37℃封閉1h處理后再次用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，之后加入100μL CA153標(biāo)準(zhǔn)抗原緩慢搖晃孵育，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入100μL上述酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂稀釋液，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，最后加入100μL彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110，用熒光酶標(biāo)儀讀取96孔酶標(biāo)板熒光強(qiáng)度值。

實(shí)施案例2：

2)將新配制的0.2mL高碘酸鈉NalO₄溶液(20mg/mL)加入到1mL彈性蛋白酶Elastase溶液(5mg/mL)中，室溫下避光攪拌20min后，用1mM PH4.4醋酸鹽緩沖液透析過夜處理，通過加入20μL 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液使體系pH達(dá)到9.0～9.3，立即加入10mg CA153標(biāo)記抗體Ab₂，室溫下避光攪拌2h后加入0.1mL硼氫化鈉NaBH₄(4mg/mL)充分反應(yīng)后用0.15M PH7.4PBS緩沖液透析過夜，得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂；

2)將100μL CA153包被抗體Ab₁(24μg/mL)加入96孔酶標(biāo)板，4℃靜置過夜處理后用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入300μL BSA(10mg/mL)37℃封閉1h處理后再次用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，之后加入100μL CA153標(biāo)準(zhǔn)抗原緩慢搖晃孵育，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入100μL上述酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂稀釋液，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，最后加入100μL彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110，用熒光酶標(biāo)儀讀取96孔酶標(biāo)板熒光強(qiáng)度值。

實(shí)施案例3：

3)將新配制的0.2mL高碘酸鈉NalO₄溶液(30mg/mL)加入到1mL彈性蛋白酶Elastase溶液(5mg/mL)中，室溫下避光攪拌20min后，用1mM PH4.4醋酸鹽緩沖液透析過夜處理，通過加入20μL 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液使體系pH達(dá)到9.0～9.3，立即加入10mg CA153標(biāo)記抗體Ab₂，室溫下避光攪拌2h后加入0.1mL硼氫化鈉NaBH₄(4mg/mL)充分反應(yīng)后用0.15M PH7.4PBS緩沖液透析過夜，得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂；

2)將100μL CA153包被抗體Ab₁(24μg/mL)加入96孔酶標(biāo)板，4℃靜置過夜處理后用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入300μL BSA(10mg/mL)37℃封閉1h處理后再次用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，之后加入100μL CA153標(biāo)準(zhǔn)抗原緩慢搖晃孵育，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入100μL上述酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂稀釋液，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，最后加入100μL彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110，用熒光酶標(biāo)儀讀取96孔酶標(biāo)板熒光強(qiáng)度值。

實(shí)施案例4：

4)將新配制的0.2mL高碘酸鈉NalO₄溶液(21.39mg/mL)加入到1mL彈性蛋白酶Elastase溶液(5mg/mL)中，室溫下避光攪拌20min后，用1mM PH4.4醋酸鹽緩沖液透析過夜處理，通過加入20μL 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液使體系pH達(dá)到9.0～9.3，立即加入5mg CA153標(biāo)記抗體Ab₂，室溫下避光攪拌2h后加入0.1mL硼氫化鈉NaBH₄(4mg/mL)充分反應(yīng)后用0.15M PH7.4PBS緩沖液透析過夜，得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂；

2)將100μL CA153包被抗體Ab₁(10μg/mL)加入96孔酶標(biāo)板，4℃靜置過夜處理后用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入300μL BSA(10mg/mL)37℃封閉1h處理后再次用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，之后加入100μL CA153標(biāo)準(zhǔn)抗原緩慢搖晃孵育，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入100μL上述酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂稀釋液，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，最后加入100μL彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110，用熒光酶標(biāo)儀讀取96孔酶標(biāo)板熒光強(qiáng)度值。

實(shí)施案例5：

5)將新配制的0.2mL高碘酸鈉NalO₄溶液(21.39mg/mL)加入到1mL彈性蛋白酶Elastase溶液(5mg/mL)中，室溫下避光攪拌20min后，用1mM PH4.4醋酸鹽緩沖液透析過夜處理，通過加入20μL 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液使體系pH達(dá)到9.0～9.3，立即加入25mg CA153標(biāo)記抗體Ab₂，室溫下避光攪拌2h后加入0.1mL硼氫化鈉NaBH₄(4mg/mL)充分反應(yīng)后用0.15M PH7.4PBS緩沖液透析過夜，得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂；

2)將100μL CA153包被抗體Ab₁(50μg/mL)加入96孔酶標(biāo)板，4℃靜置過夜處理后用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入300μL BSA(10mg/mL)37℃封閉1h處理后再次用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，之后加入100μL CA153標(biāo)準(zhǔn)抗原緩慢搖晃孵育，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入100μL上述酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂稀釋液，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，最后加入100μL彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110，用熒光酶標(biāo)儀讀取96孔酶標(biāo)板熒光強(qiáng)度值。

實(shí)施案例6：

1)將新配制的0.2mL高碘酸鈉NalO₄溶液(20mg/mL)加入到1mL彈性蛋白酶Elastase溶液(5mg/mL)中，室溫下避光攪拌20min后，用1mM PH4.4醋酸鹽緩沖液透析過夜處理，通過加入20μL 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液使體系pH達(dá)到9.0～9.3，立即加入10mg CA153標(biāo)記抗體Ab₂，室溫下避光攪拌2h后加入0.1mL硼氫化鈉NaBH₄(4mg/mL)充分反應(yīng)后用0.15M PH7.4PBS緩沖液透析過夜，得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂；

2)將100μL CA153包被抗體Ab₁(24μg/mL)加入96孔酶標(biāo)板，4℃靜置過夜處理后用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入300μL BSA(10mg/mL)37℃封閉1h處理后再次用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，之后每孔加入100μL CA153標(biāo)準(zhǔn)抗原的濃度分別為100U/mL、10U/mL、1U/mL、0.1U/mL、0.01U/mL、0.001U/mL、0.0001U/mL、0U/mL，緩慢搖晃孵育，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入100μL上述酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂稀釋液，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，最后加入100μL彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110，用熒光酶標(biāo)儀讀取96孔酶標(biāo)板熒光強(qiáng)度值。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

實(shí)施案例7：

1)將新配制的0.2mL高碘酸鈉NalO₄溶液(20mg/mL)加入到1mL彈性蛋白酶Elastase溶液(5mg/mL)中，室溫下避光攪拌20min后，用1mM PH4.4醋酸鹽緩沖液透析過夜處理，通過加入20μL 0.2M PH9.5碳酸鹽緩沖液使體系pH達(dá)到9.0～9.3，立即加入10mg CA153標(biāo)記抗體Ab₂，室溫下避光攪拌2h后加入0.1mL硼氫化鈉NaBH₄(4mg/mL)充分反應(yīng)后用0.15M PH7.4PBS緩沖液透析過夜，得到酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂；

2)將100μL CA153包被抗體Ab₁(24μg/mL)加入96孔酶標(biāo)板，4℃靜置過夜處理后用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入300μL BSA(10mg/mL)37℃封閉1h處理后再次用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，之后每孔分別加入100μL HCG、BSA、PBS、CEA、CA125、AFP、PSA、CA153抗原，緩慢搖晃孵育，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，加入100μL上述酶聯(lián)檢測探針Elastase-Ab₂稀釋液，用洗滌緩沖液沖洗96孔酶標(biāo)板，最后加入100μL彈性蛋白酶熒光底物(CBZ-Ala-Ala-Ala-Ala)₂-R110，用熒光酶標(biāo)儀讀取96孔酶標(biāo)板熒光強(qiáng)度值。建立非特異性吸附曲線。