本發(fā)明涉及一種微生物發(fā)酵方法，具體為一種安全節(jié)能的農(nóng)用微生物發(fā)酵方法，屬于農(nóng)用發(fā)酵應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
微生物菌劑或微生物菌肥，是由有益微生物與有機(jī)載體等組成的；微生物菌肥具有綜合生態(tài)效應(yīng)；可以抑制病原菌的侵染；可以充分利用各種有機(jī)物，發(fā)揮有機(jī)、無機(jī)和微生物的作用；具備有效改善土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)、刺激植物生長、增強(qiáng)植株抗逆性，特別是抗病性、提高作物產(chǎn)量和改善品質(zhì)、解磷促鉀提高化肥利用率、降解農(nóng)藥殘留、降低農(nóng)業(yè)面源污染等多種功效；產(chǎn)品應(yīng)用前景廣泛。
目前，大多數(shù)企業(yè)采用大型發(fā)酵罐液體密閉式發(fā)酵，特別在醫(yī)藥和食品領(lǐng)域，優(yōu)點(diǎn)是雜菌率低，批量大；缺點(diǎn)是一旦污染或溫度控制不好、或者基質(zhì)養(yǎng)分不足，容易整批污染，造成巨大損失；同時(shí)，加熱采用電加熱或蒸汽，溫度不好控制，耗能大，生產(chǎn)成本高；且生產(chǎn)中易產(chǎn)生大量氣泡，使用消泡劑后，發(fā)酵中產(chǎn)生的有用物質(zhì)含量降低；液體發(fā)酵的配套設(shè)備要求技術(shù)參數(shù)高，一次性投資大；因此，針對上述問題提出一種安全節(jié)能的農(nóng)用微生物發(fā)酵方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的就在于為了解決上述問題而提供一種安全節(jié)能的農(nóng)用微生物發(fā)酵方法。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)上述目的，一種安全節(jié)能的農(nóng)用微生物發(fā)酵方法，包括：
a1、根據(jù)需求制得所需菌種，保存?zhèn)溆茫?/p>
a2、活化菌株，將保存的菌種轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基平板中，置于培養(yǎng)室25～35℃恒溫培養(yǎng)4～6天；
a3、制備種子液，將制備的菌種接種到培養(yǎng)液中，在25～35℃，120～180rpm振蕩培養(yǎng)48～96h，調(diào)節(jié)接種體濃度至1×107cfu/ml，得到種子液；
a4、固體發(fā)酵，將制備的種子液，以種子液體積數(shù)與基質(zhì)質(zhì)量比為15～30％接種量與基質(zhì)混合均勻，25～35℃，基質(zhì)含水量20～30％，在發(fā)酵盤發(fā)酵培養(yǎng)8～10天后，測定接種體含量并陰涼干燥，即得所需微生物及其代謝產(chǎn)物。
優(yōu)選的，所述a2中的培養(yǎng)室采用半下潛式的玻璃培養(yǎng)室，且培養(yǎng)室為一種利用地?zé)岷吞柲茉诘蜏丶竟?jié)加熱、利用遮陽網(wǎng)和循環(huán)水在高溫季節(jié)降溫的恒溫培養(yǎng)室。
優(yōu)選的，所述a3中液體培養(yǎng)基是由可溶性淀粉20g，kno31g，k2hpo40.5g，mgso4·7h2o0.5g，nacl0.5g，feso4·7h2o0.01g，自來水補(bǔ)足至1000ml，ph調(diào)至7.2-7.4，在1.05kg/cm2蒸氣壓力下，滅菌20min制備而成。
優(yōu)選的，所述a4中的基質(zhì)由30％谷殼、55％大米粉、12％玉米秸稈、3％小米粉，在常壓下蒸氣滅菌2小時(shí)制備而成。
優(yōu)選的，所述a4中的發(fā)酵盤采用盤狀容器，且發(fā)酵盤為一種采用包布覆蓋的發(fā)酵盤。
本發(fā)明的有益效果是：該種安全節(jié)能的農(nóng)用微生物發(fā)酵方法外殼，是一種節(jié)能、安全、環(huán)保的微生物菌劑生產(chǎn)方法，所需設(shè)備簡單，原料易得，生產(chǎn)成本低，發(fā)酵方法為半下潛式玻璃溫室固體發(fā)酵法，適合多種真菌和細(xì)菌，利用太陽能和地?zé)豳Y源，溫度很容易控制在25-35℃，節(jié)能環(huán)保，另外發(fā)酵基質(zhì)容易獲得，多種農(nóng)副產(chǎn)品均可被利用，發(fā)酵原料成本較低，發(fā)酵基質(zhì)前處理簡單，不需特殊處理，簡單易行，另外發(fā)酵基質(zhì)不需要高溫高壓處理，采用普通常壓滅菌后即可用于發(fā)酵，適合農(nóng)業(yè)領(lǐng)域廣泛使用，采用盤狀容器作為發(fā)酵盤，發(fā)酵盤上采用包布覆蓋，透氣保濕，分散培養(yǎng)發(fā)酵，隔離空間雜菌，降低大批量污染的幾率；適合于發(fā)酵淡紫擬青霉、木霉菌、放線菌、鐮刀菌、芽孢桿菌等多種真菌和細(xì)菌；有良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，適合推廣使用。
附圖說明
圖1為本發(fā)明制作方法的流程示意圖。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
請參閱圖1所示，一種安全節(jié)能的農(nóng)用微生物發(fā)酵方法，包括
a1、根據(jù)需求制得所需菌種，保存?zhèn)溆茫?/p>
a2、活化菌株，將保存的菌種轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基平板中，置于培養(yǎng)室25-35℃培養(yǎng)4-6天；
a3、制備種子液，將制備的菌種接種到培養(yǎng)液中，在25-35℃，120-180rpm振蕩培養(yǎng)48-96h，調(diào)節(jié)接種體濃度至1×107cfu/ml，得到種子液；
a4、固體發(fā)酵，將制備的種子液，以種子液體積數(shù)與基質(zhì)質(zhì)量比為15-30％接種量與基質(zhì)混合均勻，25-35℃，基質(zhì)含水量20-30％，在發(fā)酵盤發(fā)酵培養(yǎng)8-10天后，測定接種體含量并陰涼干燥，即得所需微生物及其代謝產(chǎn)物。
作為本發(fā)明的一種技術(shù)優(yōu)化方案，所述a2中的培養(yǎng)室采用半下潛式的玻璃培養(yǎng)室，且培養(yǎng)室為一種利用地?zé)岷吞柲茉诘蜏丶竟?jié)加熱、利用遮陽網(wǎng)和循環(huán)水在高溫季節(jié)降溫的恒溫培養(yǎng)室。
作為本發(fā)明的一種技術(shù)優(yōu)化方案，所述a3中液體培養(yǎng)基是由可溶性淀粉20g，kno31g，k2hpo40.5g，mgso4·7h2o0.5g，nacl0.5g，feso4·7h2o0.01g，自來水補(bǔ)足至1000ml，ph調(diào)至7.2-7.4，在1.05kg/cm2蒸氣壓力下，滅菌20min制備而成。
作為本發(fā)明的一種技術(shù)優(yōu)化方案，所述a4中的基質(zhì)由30％谷殼、55％大米粉、12％玉米秸稈、3％小米粉，在常壓下蒸氣滅菌2小時(shí)制備而成。
作為本發(fā)明的一種技術(shù)優(yōu)化方案，所述a4中的發(fā)酵盤采用盤狀容器，且發(fā)酵盤為一種采用包布覆蓋的發(fā)酵盤。
本發(fā)明在使用時(shí)，該種安全節(jié)能的農(nóng)用微生物發(fā)酵方法，實(shí)施例(一)：淡紫紫孢菌固體發(fā)酵
1.1、制作pda培養(yǎng)基1000ml，在0.1mpa和121℃條件下滅菌30min；制作無菌水1000ml；
1.2、用100ml培養(yǎng)基制作5個(gè)平皿，冷卻后接種淡紫紫孢菌菌懸液，涂布均勻后于25-28℃下培養(yǎng)4天，中途觀察、剔除被污染的平板；
1.3、按照蔗糖15.0g，甘油15.0g，蛋白胨40g，k2hpo40.5g，caco30.5g，nacl0.5g，mgso40.5g，蒸餾水1000ml的配方配制菌株液體發(fā)酵繁殖用的營養(yǎng)液2000ml，裝瓶、滅菌；
1.4、根據(jù)培養(yǎng)條件，通常裝液量應(yīng)當(dāng)為100ml/250ml或230ml/500ml；在0.1mpa和121℃條件下滅菌30min；用打孔器在培養(yǎng)好的平板上均勻打孔取菌餅，或者用手術(shù)刀均等劃取菌塊，每個(gè)三角瓶中接種5-10個(gè)菌餅，于25-28℃條件下震蕩培養(yǎng)4天，期間每日觀察種子液生長狀況，并剔除可能污染的三角瓶；
1.5、按照80％麥麩、8％玉米粉、10％小米粉的配方配制母菌固體發(fā)酵用的基質(zhì)2.5kg(1.5-2kg/盤)，初始含水量(含0.5％石灰的自來水)為30％；
1.6、在±100℃條件下滅菌120min；用培養(yǎng)96h的種子液按照20％的接種量在無菌條件下接種、裝盤、覆蓋棉布，在培養(yǎng)柜內(nèi)于25-28℃條件下定植發(fā)酵；每日觀察菌絲生長狀況，隨時(shí)剔除可能污染的培養(yǎng)盤；淡紫紫孢菌菌株菌量在216h時(shí)達(dá)到最大，以此作為發(fā)酵的終點(diǎn)。
實(shí)施例(二)：非致病尖鐮孢固體發(fā)酵
1.1、制作pda培養(yǎng)基1000ml，在0.1mpa和121℃條件下滅菌30min；再制作無菌水1000ml；
1.2、用100ml培養(yǎng)基制作5個(gè)平皿，冷卻后接種非致病尖鐮孢菌懸液，涂布均勻后于25℃下培養(yǎng)4天；中途觀察、剔除被污染的平板；
1.3、按照nano32g,k2hpo41g，kcl0.5g，mgso4·7h2o0.5g，feso40.01g，蔗糖30g，酵母粉5g，h2o1000ml的配方配制菌株液體發(fā)酵繁殖用的營養(yǎng)液2000ml，裝瓶、滅菌；
1.4、根據(jù)培養(yǎng)條件，通常裝液量應(yīng)當(dāng)為120ml/250ml或230ml/500ml；在0.1mpa和121℃條件下滅菌30min；用打孔器或手術(shù)刀在培養(yǎng)好的平板上均勻打孔或切塊取菌餅，每個(gè)三角瓶中接種5-10個(gè)菌餅，于26℃、150rpm條件下震蕩培養(yǎng)4天，期間每日觀察種子液生長狀況，并剔除可能污染的三角瓶；
1.5、基質(zhì)(每公斤含)：麩皮450g、玉米粉350g、小米粉100g、米糠30g、黃豆粉20g、棉籽殼36g、nano32g、k2hpo41g、mgso40.5g、feso40.01g，ph為6.0、初始含水量為30％；
1.6、在±100℃條件下滅菌120min；用培養(yǎng)96小時(shí)的種子液按照20％的接種量在無菌條件下接種、裝盤、覆蓋棉布，在培養(yǎng)柜內(nèi)于25℃條件下定植發(fā)酵。期間每日觀察菌絲生長狀況，并隨時(shí)剔除可能污染的培養(yǎng)盤，制成非致病尖鐮孢固體菌粉。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應(yīng)將權(quán)利要求中的任何附圖標(biāo)記視為限制所涉及的權(quán)利要求。
此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。