本發(fā)明涉及具有抗腫瘤活性的苯并異硒唑酮類化合物的代謝物、合成方法及其合成過程中有活性的中間產(chǎn)物用于制備抗腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，腫瘤的預(yù)防和早期診斷技術(shù)的長(zhǎng)足發(fā)展，以及腫瘤治療方法如腫瘤切除、激素療法、放射療法和化學(xué)療法的成熟和完善，使得早期腫瘤患者的治愈率得到顯著的提高。但是對(duì)于晚期的腫瘤患者的治療，系統(tǒng)的化學(xué)療法成為其首選之一?？傮w來說，目前的化學(xué)療法可以延緩患者的病情發(fā)展、提高患者的總體生存率、改善患者的生存質(zhì)量。但是，化學(xué)療法也有很多問題：化學(xué)療法除了有比較大的毒副作用如消化道反應(yīng)、骨髓抑制、白細(xì)胞減少、血小板減少等之外，另一個(gè)非常值得關(guān)注的問題是，在長(zhǎng)期的化學(xué)治療后易引起腫瘤細(xì)胞的耐藥性而造成腫瘤的復(fù)發(fā)，這一問題尤其是在晚期腫瘤或轉(zhuǎn)移性腫瘤患者身上更易發(fā)生。腫瘤細(xì)胞的耐藥已成為化學(xué)治療失敗的主要原因。因此，開發(fā)出對(duì)耐藥腫瘤有良好的抑制活性的藥物是非常重要的。
苯并異硒唑酮類化合物因其優(yōu)良的抗炎、抗血栓和抗腫瘤作用，而得到廣泛的研究。各種取代的苯并異硒唑酮類化合物被大量合成出來，并且進(jìn)行了多種抗腫瘤細(xì)胞活性的研究。其中，CN1990475公開了取代苯并異硒唑酮類化合物及其用途；CN102234254A公開了一類苯并異硒唑類化合物及其制備方法和其應(yīng)用。乙烷硒啉是由北京大學(xué)藥學(xué)院化學(xué)生物學(xué)系曾慧慧教授課題組研發(fā)的新型有機(jī)硒藥物，目前正作為抗腫瘤新藥申報(bào)Ⅱ期臨床。在合成并研究苯并異硒唑酮類化合物代謝物的過程中，發(fā)現(xiàn)了單取代不對(duì)稱結(jié)構(gòu)的代謝衍生物有較好 的藥理活性，但未見其代謝物及其類似化合物的合成及其在抗耐藥腫瘤細(xì)胞活性方面的報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明特異性地發(fā)現(xiàn)乙烷硒啉及其類似物的代謝物以及中間體化合物，同時(shí)發(fā)現(xiàn)這類代謝物具有抗耐藥腫瘤細(xì)胞活性方面。
因此本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
一種具有通式(Ⅰ)的苯并異硒唑衍生物或其藥物學(xué)上可接受的鹽：
其中：
R1、R2相同或不同，各自獨(dú)立為氫、鹵素(例如F、Cl)、腈基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、N(C1-C6烷基)2、NH(C1-C6烷基)、COOH、SO3H。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方案，R1、R2相同，均為H；
根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選方案，R1、R2不同，R1選自甲基、甲氧基、F、Cl或硝基。
本發(fā)明所述的“C1-C6烷基”包括具有1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈低級(jí)烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、叔戊基或己基等。
本發(fā)明所述的“C1-C6烷氧基”包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、叔戊氧基或己氧基等。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供一種具有通式(Ⅰ)的苯并異硒唑酮甲基化代謝物的制備方法，包括如下步驟：
將通式(2)化合物溶于溶劑，與甲基鋰溶液混合，反應(yīng)后加水，析出沉淀，得到通式(3)化合物，再將其溶解，加稀鹽酸，得到通式(Ⅰ)。
根據(jù)本發(fā)明，所述通式(2)化合物可以由如下方法制備，包括：
1)
2)
2Se+4NaOH+Na2S2O4→Na2Se2+2Na2SO3+2H2O；
3)
4)
5)
6)
7)
8)
1)將NaOH、連二亞硫酸鈉、硒粉與溶劑(例如水)混合，得到雙硒化鈉溶液。再將取代或未取代的鄰氨基苯甲酸、鹽酸和亞硝酸鈉反應(yīng)，得到氯化2-苯甲酸重氮鹽。將該氯化2-苯甲酸重氮鹽的溶液與二硒化鈉溶液混合，反應(yīng)得到中間產(chǎn)物(1)。
2)將中間產(chǎn)物(1)與氯化亞砜反應(yīng)得到中間產(chǎn)物(2)。
3)將N-叔丁氧基羰基-乙二胺與中間產(chǎn)物(2)反應(yīng)，再與HCl反應(yīng)，之后加入堿，得到中間產(chǎn)物(3)。
4)再將中間產(chǎn)物(2)與中間產(chǎn)物(3)進(jìn)行反應(yīng)，得到所述化合物。
其中：
n為1或2，R1、R2各自獨(dú)立為氫、鹵素、腈基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、N(C1-C6烷基)2、NH(C1-C6烷基)、COOH、SO3H。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供具有通式(II)的苯并異硒唑酮甲化合物及其衍生物。
R1、R2各自獨(dú)立為氫、鹵素、腈基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、 C1-C6烷硫基、N(C1-C6烷基)2、NH(C1-C6烷基)、COOH、SO3H；其中，R1、R2不同時(shí)為氫。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方案，R1、R2相同，均為H；
根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選方案，R1、R2不同，R1選自甲基、甲氧基、F、Cl或硝基。
本發(fā)明還提供如下技術(shù)方案：
R為鹵素、腈基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、N(C1-C6烷基)2、NH(C1-C6烷基)、COOH、SO3H；
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選方案，R選自甲基、甲氧基、F、Cl或硝基。
本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的苯并異硒唑酮類化合物代謝物及其合成中間產(chǎn)物選自化合物1-5的任一種：
本發(fā)明的單取代的苯并異硒唑酮類化合物對(duì)耐藥腫瘤細(xì)胞有很好的抑制活性。
本發(fā)明的一個(gè)方面是提供一種具有通式(Ⅰ)的苯并異硒唑酮代謝物衍生物的制備方法，包括下述步驟：
1)
2)
2Se+4NaOH+Na2S2O4→Na2Se2+2Na2SO3+2H2O；
3)
4)
5)
6)
7)
8)
9)
10)
11)
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述藥物上可接受的鹽選自由無機(jī)酸或有機(jī)酸加合所得的酸鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、高氯酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、枸櫞酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、草酸鹽、酒石酸鹽、苯甲酸鹽的任一種或其組合；或者由無機(jī)堿或有機(jī)堿加和所得的堿鹽，如堿土金屬鹽、有機(jī)胺鹽的任一種或其組合。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述堿土金屬鹽選自鎂鹽或鈣鹽的任一種或其組合。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述有機(jī)胺鹽選自嗎啉鹽、哌啶鹽、三烷基胺鹽、吡啶鹽、二甲胺鹽、二乙胺鹽的任一種或其組合。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供一種藥物組合物，該組合物包含式Ⅰ所示結(jié)構(gòu)化合物、化合物1-5或其藥物學(xué)上可接受的鹽的任一種或其組合和藥物學(xué)上可接受的賦形劑或載體。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述藥物組合物適用于腸內(nèi)(例如口服或直腸給藥)、局部或腸胃外給藥，例如，口服、注射、植入、外用、噴霧、吸入等。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述口服藥物組合物選自片劑(普通片、含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、陰道片或陰道泡騰片、緩釋片、控釋片、腸溶片、口腔速釋片等)、膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊、緩釋 膠囊、控釋膠囊、腸溶膠囊等)、丸劑(滴丸、糖丸、小丸)、口服液體制劑(糖漿劑、混懸劑、口服溶液劑、口服混懸劑、口服乳劑、糖漿劑、合劑、露劑或茶劑)、顆粒劑(混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒、控釋顆粒等)、散劑的任一種。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述注射劑包括注射液、注射用無菌粉末或無菌塊狀物(包括采用溶劑結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等工藝制備)、輸液、注射用濃溶液的任一種。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述外用制劑選自栓劑、氣霧劑、粉霧劑、噴霧劑、膜劑、凝膠劑、貼劑、膠劑、貼膏劑、膏藥、軟膏劑、搽劑、洗劑、涂抹劑、凝膏劑的任一種。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，可采用本領(lǐng)域熟知的制劑技術(shù)手段來制備本發(fā)明組合物。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述藥物組合物選自包合制劑或分散制劑。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的藥學(xué)上可接受的載體為本領(lǐng)域熟知用于制備上述制劑的常用賦形劑或輔料，其中，口服制劑或外用制劑常用的賦形劑或輔料包括但不僅限于填充劑或稀釋劑、潤(rùn)滑劑或助流劑或抗粘著劑、分散劑、濕潤(rùn)劑、粘合劑、調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑等。粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃芪膠、纖維素及其衍生物、明膠漿、糖漿、淀粉漿或聚乙烯吡咯烷酮，優(yōu)選的纖維素衍生物為微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、羥丙甲基纖維素；填充劑，例如乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纖維素及其衍生物、無機(jī)鈣鹽、山梨醇或甘氨酸，優(yōu)選無機(jī)鈣鹽為硫酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、沉降碳酸鈣；潤(rùn)滑劑，例如微粉硅膠、硬脂酸鎂、滑石粉、氫氧化鋁、硼酸、氫化植物油、聚乙二醇；崩解劑，例如淀粉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纖維素，優(yōu)選的淀粉衍生物為羧甲基淀粉鈉、淀粉乙醇酸鈉、預(yù)膠化淀粉、改良淀粉、羥丙基淀粉、玉米淀粉；濕潤(rùn)劑，例如十二烷基硫酸鈉、水或醇等，優(yōu)選藥學(xué)上可接受的載體為環(huán)糊精(α-環(huán)糊 精、β-環(huán)糊精或γ-環(huán)糊精)、Celldone 102 CG、Polyplasdone XL-10、滑石粉、硬脂酸鎂或乙醇等。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述注射劑常用的賦形劑或輔料包括但不僅限于：抗氧劑，例如硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、二丁基苯酸或焦亞硫酸鈉等；抑菌劑，例如0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇；pH調(diào)節(jié)劑，例如鹽酸、枸櫞酸、氫氧化鉀(鈉)、枸櫞酸鈉及緩沖劑磷酸二氧鈉和磷酸氫二鈉；乳化劑，例如聚山梨酯-80、沒酸山梨坦、普流羅尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂；增溶劑，例如吐溫-80、甘油等。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，還可將活性成分與藥學(xué)上可接受的緩控釋載體按其制備要求加以混合，再按照本領(lǐng)域熟知的緩控釋制劑的制備方法，如加入阻滯劑包衣或?qū)⒒钚猿煞治⒛一笤僦瞥晌⑼瑁缇忈屛⑼杌蚩蒯屛⑼?；所述的緩控釋載體包括但不僅限于油脂性摻入劑、親水膠體或包衣阻滯劑等，所述的油脂性摻入劑為單硬脂酸甘油酯、氫化蓖麻油、礦油、聚硅氧烷、二甲基硅氧烷；所述的親水膠體為羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素等纖維素衍生物，或PVP、阿拉伯膠、西黃耆膠或卡波普等；所述的包衣阻滯劑為乙基纖維素(EC)、羥丙甲基纖維素(HMPC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、鄰苯二甲酸醋酸纖維素(CAP)、丙烯酸類樹脂等。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)所需給藥方式，藥學(xué)上可接受的組合物包含約1-99重量％的式Ⅰ所示結(jié)構(gòu)化合物、化合物1-5或其藥物學(xué)上可接受的鹽的任一種或其組合，以及1-99重量％適宜的藥用賦形劑。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述藥物組合物中包含約5-75重量％的式Ⅰ所示結(jié)構(gòu)化合物、化合物1-5或其藥物學(xué)上可接受的鹽的任一種或其組合，余量為藥用賦形劑。
本發(fā)明還提供上述式(I)-(III)化合物及其藥物上可接受鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述抗腫瘤作用是指用于預(yù)防或治療異常細(xì)胞 生長(zhǎng)，所述異常細(xì)胞生長(zhǎng)可以表現(xiàn)為腫瘤，所述腫瘤選自腦瘤、肺癌、肝癌、血癌、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌、軟組織肉瘤、尿道癌、前列腺癌、淋巴細(xì)胞瘤、膀胱癌、腎癌、輸尿管癌、脊椎腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤、肺癌、肝癌、血癌的任一種。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的苯并異硒唑酮類化合物在治療腫瘤時(shí)的給藥劑量約為0.05-250mg/Kg體重，優(yōu)選為0.5-200mg/Kg體重，更優(yōu)選為2-125mg/Kg體重，最更優(yōu)選為5-85mg/Kg體重。
具體實(shí)施方式
以下將結(jié)合實(shí)施例具體說明本發(fā)明，本發(fā)明的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案，并非限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。
實(shí)施例1、N,N'-亞乙烯基-2,2'-硒甲基雙苯甲酰胺
取乙烷硒啉(2.12g,5mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)(20mL)配成混懸液，N2保護(hù)條件下用注射器緩慢滴加甲基鋰的乙醚溶液(1.3mol/L,8.0mL,10.4mmol)，60℃條件下攪拌反應(yīng)3h，混懸液由黃色變?yōu)槌赛S色，加入20mL水淬滅，溶液變透明，攪拌反應(yīng)0.5h，再加入100mL水，溶液變渾濁，有橙色固體析出。過濾，用二氯甲烷洗滌。將固體溶于DMF配成飽和溶液，滴加稀鹽酸(1:5)至剛好渾濁，有白色固體析出。再滴加少量稀鹽酸后過濾，用水和二氯甲烷反復(fù)洗滌，得白色固體(0.57g，27％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.51(s,2H,NH), 7.63(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.41(m,4H,ArH),7.24(d,J＝7.6,2H,ArH),3.41(s,4H,CH2),2.17(s,6H,CH3).MS(EI)m/z:456.99(M+).
實(shí)施例2、1,2-(5-甲氧基(雙-苯并異硒唑-3(2H)-酮))乙烷
2.1、2,2'-二硒化雙苯甲酸
稱取NaOH(15.0g,0.4mol)，連二亞硫酸鈉(保險(xiǎn)粉)(17.6g,85％,0.1mol)，硒粉(15.0g,0.2mol)依次加入120L水中，升溫至50℃，攪拌反應(yīng)3h，得到黑色雙硒化鈉溶液。稱取鄰氨基苯甲酸(25.0g,0.18mol)和1:1鹽酸(75mL)攪拌混合，冰浴條件下在其中慢慢滴入亞硝酸鈉(16.0g,0.25mol)的水(35mL)的溶液，得到氯化2-苯甲酸重氮鹽。常溫?cái)嚢柘聦⒙然?-苯甲酸重氮鹽的溶液滴加二硒化鈉溶液中，混合物繼續(xù)攪拌2h。pH試紙證明溶液呈堿性，過濾未反應(yīng)的硒粉。反應(yīng)混合物用鹽酸酸化，攪拌2h，過濾，濾餅用水洗滌，干燥，得棕黃色固體(34.6g,84％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.67(br,2H,COOH),8.00(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.66(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.45(t,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.33(t,J＝7.6Hz,2H,ArH).MS(EI)m/z:401.9(M+).
2.2、2-硒氯苯甲酰氯
2,2’-二硒化雙苯甲酸(20.0g,50mmol)、氯化亞砜(100mL)和DMF(0.08mL,1.0mmol)攪拌回流3h，減壓蒸去氯化亞砜，殘?jiān)檬兔?100mL)重結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶(25g,90％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.67(br,2H,COOH),8.00(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.66(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.45(t,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.33(t,J＝7.6 Hz,2H,ArH).MS(EI)m/z:401.9(M+).
2.3、(2-(1,2-苯并異硒唑-3(2H)-酮基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
N-叔丁氧基羰基-乙二胺(1.60g,0.01mol)溶于二氯甲烷(10ml)溶液，再加入幾滴三乙胺，向混合物中緩慢滴入2-硒氯苯甲酰氯(2.72g,0.01mol)的二氯甲烷(10ml)，室溫反應(yīng)2h，減壓蒸除溶劑，加乙醚攪拌析出白色固體，依次用二氯甲烷和水洗，得白色固體(2.90g,85％)。
2.4、2-(2-氨乙基)-1,2-苯并異硒唑-3(2H)-酮鹽酸鹽
100ml三口瓶中加入(2-(1,2-苯并異硒唑-3(2H)-酮基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.00g,5.86mmol)，再加入THF(10ml)溶解，通入干燥HCl氣體1h，溶劑先澄清后渾濁生成白色沉淀，抽濾，用乙酸乙酯洗滌，得白色固體(1.15g,91.8％)。
2.5、5,5'-二甲氧基-2,2'-二硒化雙苯甲酸
稱取NaOH(15.0g,0.4mol)，保險(xiǎn)粉(17.6g,85％,0.1mol)，硒粉(15.0g,0.2mol)依次加入120L水中，升溫至50℃，攪拌反應(yīng)3h，得到黑色雙硒化鈉溶液。稱取5-甲氧基-2-氨基苯甲酸(30.0g,0.18mol)和1:1鹽酸(75mL)攪拌混合，冰浴條件下在其中慢慢滴入亞硝酸鈉(16.0g,0.25mol)的水(35mL)的溶液，得到氯化5-甲氧基-2-苯甲酸重氮鹽。常溫?cái)嚢柘聦⒙然?-甲氧基-2-苯甲酸重氮鹽的溶液滴加二硒化鈉溶液中，混合物繼續(xù)攪拌2h。pH試紙證明溶液呈堿性，過濾未反應(yīng)的硒粉。反應(yīng)混合物用鹽酸酸化，攪拌2h，過濾，濾餅用水洗滌，干燥，得棕黃色固體(31.4g，76％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.13(br,2H,COOH),7.60(d,J＝8.8,2H,ArH),7.20(d,J＝2.7,2H,ArH),7.13(dd,J1＝8.8,J2＝2.7,2H,ArH),3.75(s,6H,OCH3).MS(ESI)m/z:460.9(M+-H).
2.6、5-甲氧基-2-硒氯-苯甲酰氯
5,5'-二甲氧基-2,2'-二硒化雙苯甲酸(23.0g,0.05mol)、氯化亞砜(100mL)和DMF(0.08mL,1.0mmol)攪拌回流3h，減壓蒸去氯化亞砜，殘?jiān)檬兔?100mL)重結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶(22.9g,90％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝8.8,1H,ArH),7.39(d,J＝2.7,1H,ArH),7.33(dd,J1＝8.8,J2＝2.7,1H,ArH),3.80(s,3H,OCH3).
2.7、1,2-(5-甲氧基(雙-苯并異硒唑-3(2H)-酮))乙烷
取2-(2-氨乙基)-1,2-苯并異硒唑-3(2H)-酮鹽酸鹽(2.29g,0.01mol)溶于50mL水，加入NaOH固體(0.4g,0.01mol)，攪拌使固體全部溶解，用100ml三氯甲烷三次萃取，得到的三氯甲烷層萃取液加入少量無水Na2SO4后過濾，向溶液中加入5-甲氧基-2-硒氯-苯甲酰氯(2.84g,0.01mol)的三氯甲烷溶液(10mL)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h，過濾，得白色固體。產(chǎn)率34％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.99(d,H,J＝8.0Hz,ArH),7.86(d,H,J＝8.7Hz,ArH),7.81(d,H,J＝7.7Hz,ArH),7.58(t,H,J＝8.3Hz,ArH),7.41(m,H,ArH),7.31(d,H,J＝2.7Hz,ArH),7.22(dd,H,J1＝8.8Hz,J2＝2.8Hz ArH),4.01(s,4H,CH2),3.82(s,3H,OCH3).MS(EI)m/z:454.95([M+H]+).
實(shí)施例3、1,2-(5-氟(雙-苯并異硒唑-3(2H)-酮))乙烷
3.1、5,5'-二氟-2,2'-二硒化雙苯甲酸
稱取NaOH(7.5g,0.2mol)，保險(xiǎn)粉(8.8g,85％,0.05mol)，硒粉(7.5g,0.1mol)依次加入60L水中，升溫至50℃，攪拌反應(yīng)3h，得到黑色雙硒化鈉溶液。稱取5-氟-2-氨基苯甲酸(15.1g,0.10mol)和1:1鹽酸(37.5mL)攪拌混合，冰浴條件下在其中慢慢滴入亞硝酸鈉(8.0g,0.13mol)的水(17.5mL)的溶液，得到氯化5- 氟-2-苯甲酸重氮鹽。常溫?cái)嚢柘聦⒙然?-氟-2-苯甲酸重氮鹽的溶液滴加二硒化鈉溶液中，混合物繼續(xù)攪拌2h。pH試紙證明溶液呈堿性，過濾未反應(yīng)的硒粉。反應(yīng)混合物用鹽酸酸化，攪拌2h，過濾，濾餅用水洗滌，干燥，得黃色固體(19.9g，91％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.67(br,2H,COOH),8.00(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.66(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.45(t,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.33(t,J＝7.6Hz,2H,ArH).MS(EI)m/z:401.9(M+).
3.2、2-硒氯-5-氟--苯甲酰氯
5,5'-二氟-2,2'-二硒化雙苯甲酸(4.4g,0.01mol)、氯化亞砜(20mL)和DMF(0.01mL,0.2mmol)攪拌回流3h，減壓蒸去氯化亞砜，殘?jiān)檬兔?20mL)重結(jié)晶，得到黃色針狀結(jié)晶(4.1g,76％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.78(dd,J1＝9.0,J2＝2.7,1H,ArH),7.65(dd,J1＝8.3,J2＝5.4,1H,ArH),7.42(td,J1＝8.3,J2＝2.7,1H,ArH).
3.3、1,2-(5-氟(雙-苯并異硒唑-3(2H)-酮))乙烷
取2-(2-氨乙基)-1,2-苯并異硒唑-3(2H)-酮鹽酸鹽(2.29g,0.01mol)溶于50mL水，加入NaOH固體(0.4g,0.01mol)，攪拌使固體全部溶解，用100ml三氯甲烷三次萃取，得到的三氯甲烷層萃取液加入少量無水Na2SO4后過濾，向溶液中加入2-硒氯-5-氟-苯甲酰氯(2.72g,0.01mol)的三氯甲烷溶液(10mL)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h，過濾，得白色固體1.41g。產(chǎn)率32％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98(d,H,J＝8.3Hz,ArH),7.82(m,2H,ArH),7.75(d,H,J＝8.8Hz,ArH),7.58(m,H,ArH),7.40(m,H,ArH),7.26(m,H,ArH),4.01(s,4H,CH2).MS(EI)m/z:442.92([M+H]+).
實(shí)施例4、1,2-(5-甲基(雙-苯并異硒唑-3(2H)-酮))乙烷
4.1、5,5'-二甲基-2,2'-二硒化雙苯甲酸
稱取NaOH(7.5g,0.2mol)，保險(xiǎn)粉(8.8g,85％,0.05mol)，硒粉(7.5g,0.1mol)依次加入60L水中，升溫至50℃，攪拌反應(yīng)3h，得到黑色雙硒化鈉溶液。稱取5-甲基-2-氨基苯甲酸(15.2g,0.1mol)和1:1鹽酸(37.5mL)攪拌混合，冰浴條件下在其中慢慢滴入亞硝酸鈉(8.0g,0.13mol)的水(17.5mL)的溶液，得到氯化5-氯-2-苯甲酸重氮鹽。常溫?cái)嚢柘聦⒙然?-氯-2-苯甲酸重氮鹽的溶液滴加二硒化鈉溶液中，混合物繼續(xù)攪拌2h。pH試紙證明溶液呈堿性，過濾未反應(yīng)的硒粉。反應(yīng)混合物用鹽酸酸化，攪拌2h，過濾，濾餅用水洗滌，干燥，得黃色固體(20.3g，90％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.67(br,2H,COOH),8.00(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.66(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.45(t,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.33(t,J＝7.6Hz,2H,ArH).MS(EI)m/z:401.9(M+).
4.2、2-硒氯-5-甲基-苯甲酰氯
5,5'-二甲基-2,2'-二硒化雙苯甲酸(4.3g,0.01mol)、氯化亞砜(20mL)和DMF(0.01mL,0.2mmol)攪拌回流3h，減壓蒸去氯化亞砜，殘?jiān)檬兔?20mL)重結(jié)晶，得到橙色針狀結(jié)晶(4.7g,87％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝8.2,1H,ArH),7.65(s,1H,ArH),7.48(d,J＝8.2,1H,ArH),2.37(s,6H,CH3).
4.3、1,2-(5-甲基(雙-苯并異硒唑-3(2H)-酮))乙烷
取2-(2-氨乙基)-1,2-苯并異硒唑-3(2H)-酮鹽酸鹽(2.29g,0.01mol)溶于50 mL水，加入NaOH固體(0.4g,0.01mol)，攪拌使固體全部溶解，用100ml三氯甲烷三次萃取，得到的三氯甲烷層萃取液加入少量無水Na2SO4后過濾，向溶液中加入2-硒氯-5-甲基-苯甲酰氯(2.89g,0.01mol)的三氯甲烷溶液(10mL)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h，過濾，得橙黃色固體1.45g。產(chǎn)率33％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.96(d,H,J＝8.4Hz,ArH),7.83(m,2H,ArH),7.59(m,2H,ArH),7.58(m,H,ArH),7.40(d,2H,J＝8.0Hz,ArH),7.26(m,H,ArH),4.01(s,4H,CH2),2.39(s,3H,CH3).MS(EI)m/z:438.94([M+H]+).
實(shí)施例5、1,2-(5-硝基(雙-苯并異硒唑-3(2H)-酮))乙烷的制備
5.1、5,5'-二硝基-2,2'-二硒化雙苯甲酸
稱取NaOH(7.5g,0.2mol)，保險(xiǎn)粉(8.8g,85％,0.05mol)，硒粉(7.5g,0.1mol)依次加入60L水中，升溫至50℃，攪拌反應(yīng)3h，得到黑色雙硒化鈉溶液。稱取5-硝基-2-氨基苯甲酸(18.3g,0.10mol)和1:1鹽酸(37.5mL)攪拌混合，冰浴條件下在其中慢慢滴入亞硝酸鈉(8.0g,0.13mol)的水(17.5mL)的溶液，得到氯化5-硝基-2-苯甲酸重氮鹽。常溫?cái)嚢柘聦⒙然?-硝基-2-苯甲酸重氮鹽的溶液滴加二硒化鈉溶液中，混合物繼續(xù)攪拌2h。pH試紙證明溶液呈堿性，過濾未反應(yīng)的硒粉。反應(yīng)混合物用鹽酸酸化，攪拌2h，過濾，濾餅用水洗滌，干燥，得褐色固體(17.0g,69％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.67(br,2H,COOH),8.00(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.66(d,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.45(t,J＝7.6Hz,2H,ArH),7.33(t,J＝7.6Hz,2H,ArH).MS(EI)m/z:401.9(M+).
5.2、2-硒氯-5-硝基-苯甲酰氯
5,5'-二甲基-2,2'-二硒化雙苯甲酸(4.3g,0.01mol)、氯化亞砜(20mL)和DMF(0.01mL,0.2mmol)攪拌回流3h，減壓蒸去氯化亞砜，殘?jiān)檬兔?20mL)重結(jié)晶，得到褐色針狀結(jié)晶(4.0g,67％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(d,J＝2.1,1H,ArH),8.01(dd,J1＝8.5,J2＝2.1,1H,ArH),7.89(d,J＝8.5,1H,ArH).
5.3、1,2-(5-硝基(雙-苯并異硒唑-3(2H)-酮))乙烷
取2-(2-氨乙基)-1,2-苯并異硒唑-3(2H)-酮鹽酸鹽(2.29g,0.01mol)溶于50mL水，加入NaOH固體(0.4g,0.01mol)，攪拌使固體全部溶解，用100ml三氯甲烷三次萃取，得到的三氯甲烷層萃取液加入少量無水Na2SO4后過濾，向溶液中加入2-硒氯-5-硝基-苯甲酰氯(3.20g,0.01mol)的三氯甲烷溶液(10mL)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h，過濾，得淡黃色固體1.45g。產(chǎn)率31％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(m,H,ArH),8.37(m,H,ArH),8.26(dd,H,J1＝8.9Hz,J2＝4.5Hz ArH),7.98(d,H,J＝7.3Hz ArH),7.81(dd,H,J1＝15.0Hz,J2＝9.7Hz ArH),7.58(d,H,J＝7.3Hz ArH),7.40(m,H,ArH),4.06(s,4H,CH2).MS(EI)m/z:438.94([M+H]+).
以下通過藥效試驗(yàn)例以驗(yàn)證本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性。
實(shí)施例6本發(fā)明化合物1-5對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制活性研究
采用SRB法，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549、U87、HepG2、RKO、MiaPaca2和LOVO細(xì)胞接種于96孔板，接種密度為4×104個(gè)/ml，180μl/孔；待細(xì)胞貼壁后，每孔加入20μl的藥液，使藥物終濃度分別為0μM，1μM，5μM，10μM，20μM，50μM。作用48h后，棄去培養(yǎng)液，終點(diǎn)每孔加入100μl/4℃％，w/v)(三氟乙酸溶液)，TCA濃度為10％(V/VOL)，將96孔板4℃放置1h。棄液，300ul dd2O洗三次，室溫干燥1h或更久。每孔中加入100μl 0.057％(w/v)SRB溶液(1％的乙酸配制)，室溫放置30min，倒掉染料。棄染液，每孔用150μl 1％乙酸洗四次，室溫干燥透。每孔中加入200μl 10mM Tris-base(三羥甲基胺基甲 烷)溶解染料，排槍吹勻，搖床5min，室溫30min。于酶標(biāo)儀510nm處測(cè)吸光度OD值。
結(jié)果見表1。
表1化合物1-5體外對(duì)腫瘤細(xì)胞作用48h的抑制活性
此外，上述化合物1-5采用與實(shí)施例1類似的方法，R1選自甲基、甲氧基、F、Cl或硝基。