本發(fā)明涉及抗腫瘤化合物的研究領(lǐng)域，更具體的涉及二苯并萘啶酮類化合物，及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

二苯并萘啶酮類化合物是一類非常重要的拓?fù)洚悩?gòu)酶I的毒化劑，具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性，具有很好的靶向拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抗腫瘤新藥研發(fā)前景，最早報道這類化合物的合成及抗腫瘤活性的的美國新澤西州立大學(xué)的Lavoie,Edmond J.課題組,他們自2002年就開始報道這類化合物的合成及抗腫瘤活性研究，相關(guān)研究成果已經(jīng)發(fā)表了許多論文，并申請了許多專利(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters(2002),12(22),3333-3336；Bioorganic&Medicinal Chemistry(2003),11(9),2061-2073；Journal of Medicinal Chemistry(2003),46(11),2254-2257；Bioorganic&Medicinal Chemistry(2004),12(13),3731-3742；Journal of Medicinal Chemistry(2005),48(3),792-804；Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters(2008),18(12),3570-3572；Bioorganic&Medicinal Chemistry(2008),16(20),9295-9301；European Journal of Medicinal Chemistry(2009),44(4),1471-1476；European Journal of Medicinal Chemistry(2009),44(9),3433-3438.WO 2003041653；WO 2003041660；WO 2004014906；WO 2004014918；WO 2010088544；WO 2010127360；WO 2010127363；WO 2012015875；WO 2012015901)。

現(xiàn)有的二苯并萘啶酮類化合物的合成路線(Scheme 1)為：

2013年，法國Desbois,Nicolas課題組又報道了這類化合物與鉑離子的配合物的制備及其抗腫瘤活性(European Journal of Medicinal Chemistry(2013),69,719-727)。

雖然目前為止已經(jīng)有以上文獻(xiàn)這類化合物的合成及抗腫瘤活性研究報道，但他們采用的合成路線都是是從中間體2開始(Scheme 1)，中間體2的合成一般以芳醛為原料，經(jīng)硝化、醛基與甲基格氏試劑的反應(yīng)、醇的氧化、硝基的還原、鄰氨基芳乙酮跟甲酸酯環(huán)化成喹啉酮及喹啉酮與三氯氧磷的作用等5-6步反應(yīng)，步驟非常繁瑣。另外其合成所需要的另一個原料鄰碘(溴)芳甲酸4也不太容易得到，限制了產(chǎn)物的取代基R¹,R²及R³多樣化。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗腫瘤功效的二苯并萘啶酮類化合物，及其制備方法和應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

具有通式(I)的二苯并萘啶酮類化合物：

其中，其中，R^1a獨(dú)立地選自-H、-CH₃O，R^1b為-CH₃O；

當(dāng)R^2a為-Cl時，R^2b和R^2c均為-H；當(dāng)R^2b為-Cl時，R^2a和R^2c均為-H；當(dāng)R^2c獨(dú)立地選自-F、-Cl、-Br、-CH₃、-CH₃O、-CF₃時，R^2a和R^2b為-H；

R³為(CH₂)₂N(CH₃)₂或(CH₂)₃N(CH₃)₂。

制備具有通式(I)的二苯并萘啶酮類化合物的方法，包括以下步驟：

(1)依次加入苯乙酸、無水乙醇、環(huán)己烷以及濃硫酸，回流反應(yīng)至不再有水分，除去環(huán)己烷和剩余的乙醇，加入冰水，萃取，合并有機(jī)層，有機(jī)層干燥，除去溶劑，經(jīng)柱層析得化合物A；

(2)依次加入化合物A、二甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下反應(yīng)，反應(yīng)溫度為70～90℃，反應(yīng)完成后除去二甲基甲酰胺和剩余的N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛，得到化合物B的粗產(chǎn)物；再依次加入甲苯、對甲苯磺酸和苯胺，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下，進(jìn)行加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)完成后，除去溶劑，經(jīng)柱層析得化合物C；

(3)依次加入化合物C和二苯醚，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下，進(jìn)行加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)完成后，冷卻，加入溶劑，攪拌均勻后抽濾，濾渣經(jīng)洗滌后得到化合物D；

(4)化合物D在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下，進(jìn)行氯代反應(yīng)，得到化合物E；

(5)加入化合物E、乙二醇和鏈狀二胺，加熱至140～160℃反應(yīng)，反應(yīng)完成后獲得混合物A，將混合物A倒入水中，調(diào)節(jié)pH，攪拌均勻，萃取，合并有機(jī)層，有機(jī)層干燥，除去溶劑，經(jīng)柱層析得到化合物F；

(6)依次加入化合物F、四氫呋喃和三乙胺，攪拌均勻后，攪拌加入氯甲酸乙酯，攪拌反應(yīng)至反應(yīng)完成，除去溶劑，冷卻，調(diào)節(jié)pH，萃取，合并有機(jī)層，有機(jī)層干燥，除去溶劑，經(jīng)柱層析得到化合物G；

(7)依次加入二甲苯、三氯氧磷和五氧化二磷，攪拌均勻后，加入已預(yù)溶于二甲苯的化合物G，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下，加熱回流至反應(yīng)結(jié)束，除去溶劑及三氯氧磷，冷卻，調(diào)節(jié)pH＞7，萃取，合并有機(jī)層，有機(jī)層干燥，除去溶劑，經(jīng)柱層析得到通式(I)的二苯并萘啶酮類化合物。

進(jìn)一步的，所述步驟(1)中，依次加入苯乙酸、無水乙醇、環(huán)己烷以及濃硫酸，回流反應(yīng)至不再有水分，除去環(huán)己烷和剩余的乙醇，加入溶劑，依次用冰水和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，萃取，合并有機(jī)層，有機(jī)層干燥，除去溶劑，經(jīng)柱層析得化合物A；

進(jìn)一步的，所述步驟(2)中，依次加入化合物A、二甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下反應(yīng)，反應(yīng)溫度為75～85℃，反應(yīng)時間為5～8h，反應(yīng)完成后除去二甲基甲酰胺和剩余的N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛，得到化合物B的粗產(chǎn)物；再依次加入甲苯、對甲苯磺酸和苯胺，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下進(jìn)行加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)溫度為120～130℃，反應(yīng)時間為5～8h，反應(yīng)完成后，除去溶劑，經(jīng)柱層析得化合物C。

進(jìn)一步的，所述步驟(4)中，依次加入化合物D和三氯氧磷，攪拌均勻，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下進(jìn)行加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)溫度為100～120℃，反應(yīng)時間為1.5～3h，反應(yīng)完成后，除去三氯氧磷，然后加入冰水，并調(diào)節(jié)pH至堿性，用有機(jī)溶劑萃取后，合并有機(jī)層，有機(jī)層用去除水分的干燥劑干燥，除去溶劑，經(jīng)柱層析得到化合物E。

進(jìn)一步的，所述步驟(5)中，加入化合物E、乙二醇和鏈狀二胺，混勻后，攪拌加熱反應(yīng)，反應(yīng)溫度為140～160℃，反應(yīng)時間為23～26h，反應(yīng)完成后獲得混合物A，將混合物A倒入水中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8～12％的氫氧化鈉水溶液，攪拌均勻，萃取，合并有機(jī)層，有機(jī)層用去除水分的干燥劑干燥，除去溶劑，經(jīng)柱層析得到化合物F。

進(jìn)一步的，所述步驟(6)中，依次加入化合物F、四氫呋喃和三乙胺，攪拌均勻后，室溫下攪拌加入氯甲酸乙酯，攪拌反應(yīng)0.4～1h至反應(yīng)完成，除去溶劑，加入冰水和飽和碳酸氫鈉溶液，用有機(jī)溶劑萃取，合并有機(jī)層，有機(jī)層用去除水分的干燥劑干燥，除去溶劑，經(jīng)柱層析得到化合物G。

進(jìn)一步的，所述步驟(7)中，向反應(yīng)容器依次加入二甲苯、三氯氧磷和五氧化二磷，攪拌均勻后，加入已預(yù)溶于二甲苯的化合物G，在氮?dú)饣蚨栊詺怏w保護(hù)下進(jìn)行加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)溫度為130～160℃，反應(yīng)時間為23～26h，除去溶劑及三氯氧磷，加入冰水，調(diào)節(jié)反應(yīng)容器中混合物的pH＞7，用有機(jī)溶劑萃取，合并有機(jī)層，有機(jī)層用去除水分的干燥劑干燥，除去溶劑，經(jīng)柱層析得到通式(I)的二苯并萘啶酮類化合物。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了通式(I)的二苯并萘啶酮類化合物和藥學(xué)上可接受的輔料組成的藥物組合物。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了通式(I)的二苯并萘啶酮類化合物或權(quán)利要求8所述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用；藥物的劑型可為顆粒劑、膠囊劑、噴霧劑、滴劑、注射劑和沖劑等；所述的腫瘤特別是指人胃癌、人肺癌、人肝癌引發(fā)的腫瘤。

本發(fā)明合成了具有通式(I)的化合物，并提供了其制備方法，通過對人胃癌細(xì)胞(MGC-803)、人肺癌細(xì)胞(NCI-H460)、人肝癌細(xì)胞(HepG-2)、人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)的細(xì)胞體外抑制試驗(yàn)，證實(shí)通式(I)的新化合物對這四種腫瘤細(xì)胞均具有很好的抑制活性。

將通式(I)的化合物與藥學(xué)上可接受的輔料組成藥物組合物，由于該藥物組合物添加了對腫瘤細(xì)胞具有很好抑制活性的通式(I)化合物，對腫瘤細(xì)胞尤其是人胃癌細(xì)胞(MGC-803)、人肺癌細(xì)胞(NCI-H460)、人肝癌細(xì)胞(HepG-2)、人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)的細(xì)胞具有很好地抑制活性的作用，將在抗腫瘤藥物方面具有較好的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于以下實(shí)施例。

制備實(shí)施例1：化合物H1的制備：5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

(1)在攪拌下依次向50mL圓底燒瓶中加入3,4-二甲氧基苯乙酸(1.96g，10mmol)、無水乙醇(5mL)、環(huán)己烷(5mL)以及濃硫酸(1mL)，裝上分水器和直型冷凝管后,在100℃下回流直至分水器中不再有水分出；反應(yīng)完成后，減壓除去環(huán)己烷和多余的乙醇，向燒瓶中加入乙酸乙酯(30mL)，混合物用冰水洗滌2次，每次30mL，再用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌2次，每次30mL，有機(jī)溶劑萃取3次，合并有機(jī)層，有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓除去溶劑，用硅膠柱層析(洗脫劑：V_石油醚:V_乙酸乙酯＝8:1)提純，得到1.85g淡黃色油狀酯化產(chǎn)物，即化合物A。

(2)在攪拌下依次向50mL圓底燒瓶中加入上述化合物A(0.90g，4mmol)、DMF(3mL)和DMF-DMA(1.1mL，4.4mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于80℃油浴加熱反應(yīng)6h，采用TLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程，展開劑為V_石油醚:V_乙酸乙酯＝3:1，反應(yīng)完成后減壓除去DMF及剩余的DMF-DMA，得到化合物B的粗產(chǎn)物；在攪拌下依次向上述燒瓶中加入甲苯(20mL)、對甲苯磺酸(0.05g，0.3mmol)和對氯苯胺(0.41g，3.2mmol)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于125℃油浴加熱回流6h，采用TLC監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程，展開劑為V_石油醚:V_乙酸乙酯＝3:1)，反應(yīng)完成后，減壓除去溶劑,用硅膠柱層析分離(洗脫劑：V_石油醚:V_乙酸乙酯＝6:1)，得到0.90g淡黃綠色油狀化合物C，產(chǎn)率63％。

(3)依次向100mL圓底燒瓶中加入上述合成的化合物C(5.46g，15.1mmol)和二苯醚(20mL)，攪拌均勻后，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下用電熱套加熱回流2h，采用TLC監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程，展開劑為V_石油醚:V_乙酸乙酯＝1:1；反應(yīng)完成后，自然冷卻至室溫，燒瓶中析出大量固體，向燒瓶中加入石油醚(20mL)，攪拌均勻后抽濾，濾渣用混合溶劑(V_石油醚:V_乙酸乙酯＝1:1)(10mL)洗滌后，得到4.05g白色固體化合物D，產(chǎn)率85％。

(4)依次向50mL圓底燒瓶中加入上述合成的化合物D(4.05g，12.9mmol)和三氯氧磷(20mL)，攪拌均勻后，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于110℃油浴加熱回流2h，采用TLC監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程，展開劑為V_石油醚:V_乙酸乙酯＝3:1，反應(yīng)完成后，減壓除去大部分三氯氧磷，在攪拌下向燒瓶中緩慢加入飽和碳酸氫鈉溶液至pH＞7，然后用二氯甲烷萃取3次，每次20mL；合并有機(jī)層，有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌2次，每次20mL，洗滌后有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓除去溶劑，用硅膠柱層析(洗脫劑：V_石油醚:V_乙酸乙酯＝6:1)，得到3.55g白色固體化合物E，產(chǎn)率83％。

(5)依次向20mL反應(yīng)釜中加入上述合成的白色化合物E(0.30g，1mmol)、乙二醇(10mL)和N,N-二甲基乙二胺(0.33mL,3mmol)，混勻后封閉反應(yīng)釜，置于150℃油浴攪拌加熱24h，采用TLC監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程，展開劑為V_石油醚:V_乙酸乙酯＝3:1，反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物倒入水(30mL)中，然后向其中加入10％氫氧化鈉水溶液(10mL)，攪拌均勻后用二氯甲烷萃取3次，每次20mL，合并有機(jī)層，有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌2次，每次20mL，洗滌后用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓除去溶劑，用硅膠柱層析(洗脫劑：V_石油醚:V_乙酸乙酯＝4:1)，得到0.30g淡黃色油狀化合物F，產(chǎn)率78％。

(6)依次向50mL圓底燒瓶中加入上述合成的化合物(0.80g，2.09mmol)、四氫呋喃(10mL)和三乙胺(0.87mL,6.27mmol)，攪拌均勻后，在室溫下攪拌加入氯甲酸乙酯(0.59mL，6.27mmol)，加完后在室溫下攪拌反應(yīng)0.5h，采用TLC監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程，展開劑為V_石油醚:V_乙酸乙酯＝3:1)，反應(yīng)完成后，減壓除去溶劑，依次向燒瓶中加入冰水(20mL)以及飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌均勻后用二氯甲烷萃取3次，每次15mL，合并有機(jī)層，有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌2次，每次20mL，洗滌后有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓除去溶劑，用硅膠柱層析(洗脫劑：V_石油醚:V_乙酸乙酯＝4:1)，得到0.84g淡黃色油狀化合物G，產(chǎn)率88％。

(7)在攪拌下依次向25mL圓底燒瓶中加入二甲苯(5mL)、三氯氧磷(1mL)以及五氧化二磷(約0.20g)，在室溫下攪拌0.5h后，向燒瓶中加入預(yù)溶于10mL二甲苯的上述合成的化合物G(0.20g，0.44mmol)，攪拌均勻后，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于150℃油浴加熱回流24h，采用TLC監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程，展開劑為V_石油醚:V_乙酸乙酯＝1:1，原料依然反應(yīng)不完，停止加熱，減壓除去溶劑及三氯氧磷，然后向燒瓶中加入15mL冰水，將混合物倒入100mL燒杯中，在攪拌下向燒杯中緩慢加入飽和碳酸氫鈉溶液至溶液pH＞7，然后用二氯甲烷萃取3次，每次20mL，合并有機(jī)層，有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌2次，每次20mL，洗滌后有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓除去溶劑，粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析得到0.07g白色目標(biāo)化合物H1,產(chǎn)率37％。

化合物H1：m.p.240～241℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.38(s,6H,N(CH₃)₂),3.09(t,J＝7.05Hz,2H,CH₂),4.05(s,3H,OCH₃),4.12(s,3H,OCH₃),4.61(t,J＝7.05Hz,2H,CH₂),7.66(dd,J＝8.85Hz,1.70Hz,1H,ArH),7.69(s,1H,ArH),7.89(s,1H,ArH),8.10(d,J＝8.85Hz,1H,ArH),8.68(d,J＝1.70Hz,1H,ArH),9.51(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:45.97,49.29,56.44,56.48,57.86,102.26,108.90,112.43,119.76,119.89,124.10,127.27,129.97,131.99,132.18,140.15,145.94,147.19,150.93,154.43,163.75；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺412.1428(C₂₂H₂₂ClN₃O₃),實(shí)驗(yàn)值412.1430。

制備實(shí)施例2：化合物H2的制備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-1-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以鄰氯苯胺代替對氯苯胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀目標(biāo)化合物H2。

化合物H2：產(chǎn)率36％,m.p.222～223℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.26(s,6H,N(CH₃)₂),2.94(t,J＝7.10Hz,2H,CH₂),4.05(s,3H,OCH₃),4.11(s,3H,OCH₃),4.67(t,J＝7.10Hz,2H,CH₂),7.49(dd,J＝8.70Hz,7.45Hz,1H,ArH),7.69(s,1H,ArH),7.85(dd,J＝7.45Hz,0.95Hz,1H,ArH),7.89(s,1H,ArH),8.41(d,J＝8.70Hz,1H,ArH),9.65(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:45.89,49.47,56.38,56.43,57.77,102.16,108.87,112.63,119.91,120.13,120.50,123.78,125.55,127.08,129.52,134.52,141.26,144.89,146.09,150.91,154.42,163.89；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺412.1428(C₂₂H₂₂ClN₃O₃),實(shí)驗(yàn)值412.1443。

制備實(shí)施例3:化合物H3的制備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-2-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以間氯苯胺代替對氯苯胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體目標(biāo)化合物H3。

化合物H3：產(chǎn)率14％,m.p.235～236℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.31(s,6H,N(CH₃)₂),2.99(t,J＝7.25Hz,2H,CH₂),4.03(s,3H,OCH₃),4.10(s,3H,OCH₃),4.61(t,J＝7.25Hz,2H,CH₂),7.52(dd,J＝9.25Hz,2.30Hz,1H,ArH),7.63(s,1H,ArH),7.84(s,1H,ArH),8.10(d,J＝2.30Hz,1H,ArH),8.45(d,J＝9.25Hz,1H,ArH),9.48(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:45.87,49.01,56.38,56.43,57.68,102.02,108.73,111.91,117.32,119.53,126.15,126.75,127.27,129.34,135.06,140.78,146.71,149.32,150.71,154.35,163.59；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺412.1428(C₂₂H₂₂ClN₃O₃),實(shí)驗(yàn)值412.1434。

制備實(shí)施例4:化合物H4的制備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-fluorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對氟苯胺代替對氯苯胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體目標(biāo)化合物H4。

化合物H4：產(chǎn)率42％,m.p.223～224℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.35(s,6H,N(CH₃)₂),3.04(t,J＝7.10Hz,2H,CH₂),4.05(s,3H,OCH₃),4.12(s,3H,OCH₃),4.64(t,J＝7.10Hz,2H,CH₂),7.67(br,1H,ArH),7.70(s,1H,ArH),7.89(s,1H,ArH),8.15(dd,J＝9.15Hz,2.60Hz,1H,ArH),8.34(dd,J＝11.80Hz,2.60Hz,1H,ArH),9.51(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:45.91,48.79,56.43,57.79,102.25,108.85,109.40,109.61,112.33,118.87,119.07,119.61,119.68,119.90,127.31,132.85,132.92,140.39,145.14,145.86,150.85,154.35,159.18,161.14,163.74；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺396.1723(C₂₂H₂₂FN₃O₃),實(shí)驗(yàn)值396.1733。

制備實(shí)施例5:化合物H5的制備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-brominedibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對溴苯胺代替對氯苯胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體狀目標(biāo)化合物H5。

化合物H5：產(chǎn)率39％,m.p.246～247℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.38(s,6H,N(CH₃)₂),3.08(t,J＝7.05Hz,2H,CH₂),4.05(s,3H,OCH₃),4.12(s,3H,OCH₃),4.58(t,J＝7.05Hz,2H,CH₂),7.67(s,1H,ArH),7.77(dd,J＝8.85Hz,1.95Hz,1H,ArH),7.88(s,1H,ArH),8.00(d,J＝8.85Hz,1H,ArH),8.86(d,J＝1.95Hz,1H,ArH),9.50(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:46.04,49.41,56.43,56.46,57.89,102.16,108.79,112.30,119.80,120.13,120.17,120.27,127.19,132.04,132.57,139.95,145.99,147.36,150.86,154.35,163.67；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺456.0923(C₂₂H₂₂BrN₃O₃),實(shí)驗(yàn)值456.0933。

制備實(shí)施例6:化合物H6的制備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-methyldibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲基苯胺代替對氯苯胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體目標(biāo)化合物H6。

化合物H6：產(chǎn)率18％,m.p.198～199℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.38(s,6H,N(CH₃)₂),2.60(s,3H,CH₃),3.08(t,J＝7.23Hz,2H,CH₂),4.05(s,3H,OCH₃),4.12(s,3H,OCH₃),4.70(t,J＝7.23Hz,2H,CH₂),7.56(dd,J＝8.45Hz,1.55Hz,1H,ArH),7.70(s,1H,ArH),7.90(s,1H,ArH),8.06(d,J＝8.45Hz,1H,ArH),8.31(s,1H,ArH),9.48(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:22.08,45.87,49.13,56.40,56.45,57.84,102.16,108.77,111.98,118.94,119.59,123.89,127.73,130.20,131.32,136.13,140.47,144.81,147.31,150.55,154.29,163.96；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺392.1974(C₂₃H₂₅N₃O₃),實(shí)驗(yàn)值392.1982。

制備實(shí)施例7:化合物H7的制備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-methoxydibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲氧基苯胺代替對氯苯胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體目標(biāo)化合物H7。

化合物H7：產(chǎn)率18％,m.p.209～210℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.29(s,6H,N(CH₃)₂),3.05(t,J＝7.25Hz,2H,CH₂),4.03(s,3H,OCH₃),4.04(s,3H,OCH₃),4.11(s,3H,OCH₃),4.69(t,J＝7.25Hz,2H,CH₂),7.37(dd,J＝9.10Hz,2.55Hz,1H,ArH),7.67(s,1H,ArH),7.75(d,J＝2.55Hz,1H,ArH),7.87(s,1H,ArH),8.05(d,J＝9.10Hz,1H,ArH),9.39(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:45.88,49.00,55.99,56.37,56.42,58.02,102.24,104.36,108.74,112.38,119.67,119.81,121.02,127.63,131.36,131.94,140.02,143.30,144.68,150.57,154.24,157.54,164.00；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺408.1923(C₂₃H₂₅N₃O₄),實(shí)驗(yàn)值408.1929。

制備實(shí)施例8:化合物H8的制備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-trifluoromethyldi-benzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對三氟甲基苯胺代替對氯苯胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體狀目標(biāo)化合物H8。

化合物H8：產(chǎn)率26％,m.p.227～228℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.32(s,6H,N(CH₃)₂),3.08(t,J＝7.05,2H,CH₂),4.06(s,3H,OCH₃),4.13(s,3H,OCH₃),4.63(t,J＝7.05Hz,2H,CH₂),7.70(s,1H,ArH),7.88～7.91(m,2H,ArH),8.26(d,J＝8.70Hz,1H,ArH),9.02(s,1H,ArH),9.62(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:45.86,49.69,56.46,56.50,57.81,102.18,108.88,112.55,118.35,119.87,123.19,124.95,127.11,131.59,141.40,147.71,149.81,151.03,154.50,163.64；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺446.1692(C₂₃H₂₂F₃N₃O₃),實(shí)驗(yàn)值446.1699。

制備實(shí)施例9:化合物H9的制備5H-8-methoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲氧基苯乙酸代替3,4-二甲氧基苯乙酸，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體目標(biāo)化合物H9。

化合物H9：產(chǎn)率38％,m.p.170～171℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.38(s,6H,N(CH₃)₂),3.09(t,J＝7.05Hz,2H,CH₂),3.98(s,3H,OCH₃),4.64(t,J＝7.05Hz,2H,CH₂),7.45(dd,J＝8.90Hz,2.80Hz,1H,ArH),7.66(dd,J＝8.90Hz,2.10Hz,1H,ArH),7.94(d,J＝2.80Hz,1H,ArH),8.10(d,J＝8.95Hz,1H,ArH),8.33(d,J＝8.95Hz,1H,ArH),8.88(d,J＝2.10Hz,1H,ArH),9.59(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:45.81,49.24,55.78,57.57,109.00,112.68,119.63,123.28,123.59,123.81,125.73,126.99,129.76,131.90,132.08,139.19,145.89,146.99,160.34,164.01；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺382.1322(C₂₁H₂₀ClN₃O₂),實(shí)驗(yàn)值382.1330。

制備實(shí)施例10:化合物H10的制備5H-8-methoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-methyldibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲氧基苯乙酸代替3,4-二甲氧基苯乙酸，以對甲基苯胺代替對氯苯胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體狀目標(biāo)化合物H10。

化合物H10：產(chǎn)率33％,m.p.209～210℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.34(s,6H,N(CH₃)₂),2.60(s,3H,CH₃),3.05(t,J＝7.20Hz,2H,CH₂),3.97(s,3H,OCH₃),4.68(t,J＝7.20Hz,2H,CH₂),7.42(dd,J＝8.90Hz,2.85Hz,1H,ArH),7.54(dd,J＝8.45Hz,1.55Hz,1H,ArH),7.94(d,J＝2.85Hz,1H,ArH),8.05(d,J＝8.45Hz,1H,ArH),8.31～8.33(m,2H,ArH),9.54(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:21.91,45.85,49.37,55.73,57.75,108.88,112.17,118.85,123.15,123.40,123.69,126.21,126.75,130.13,131.03,135.91,139.57,144.79,147.19,159.98,164.20；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺362.1869(C₂₂H₂₃N₃O₂),實(shí)驗(yàn)值362.1878。

制備實(shí)施例11:化合物H11的制備5H-8-methoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-methoxy dibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲氧基苯乙酸代替3,4-二甲氧基苯乙酸，以對甲氧基苯胺代替對氯苯胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體狀目標(biāo)化合物H11。

化合物H11：產(chǎn)率38％,m.p.169～170℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.28(s,6H,N(CH₃)₂),3.04(t,J＝7.25Hz,2H,CH₂),3.98(s,3H,OCH₃),4.04(t,J＝7.25Hz,2H,CH₂),7.38(dd,J＝9.15Hz,2.65Hz,1H,ArH),7.43(dd,J＝8.95Hz,2.70Hz,1H,ArH),7.78(d,J＝2.70Hz,1H,ArH),7.94(d,J＝2.80Hz,1H,ArH),8.07(d,J＝9.15Hz,1H,ArH),8.33(d,J＝8.95Hz,1H,ArH),9.48(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:45.94,49.25,55.88,55.99,57.98,104.28,109.05,112.81,119.89,120.96,123.43,123.54,126.31,127.00,132.02,139.31,143.44,144.68,157.58,160.21,164.45；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺378.1818(C₂₂H₂₃N₃O₃),實(shí)驗(yàn)值378.1793。

制備實(shí)施例12:化合物H12的制備5H-8-methoxy-5-(2-N,N-dimethylaminopropyl)-3-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthayridin-6-one

以N,N-二甲基丙二胺代替N,N-二甲基乙二胺，其他制備方法同制備實(shí)施例1，得到白色粉末狀固體目標(biāo)化合物H12。

化合物H12：產(chǎn)率30％,m.p.211～213℃；¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:2.35(s,6H,N(CH₃)₂),2.42(m,2H,CH₂),2.60(t,J＝7.10Hz,2H,CH₂),4.06(s,3H,OCH₃),4.13(s,3H,OCH₃),4.51(t,J＝7.10Hz,2H,CH₂),7.65(dd,J＝8.90Hz,2.15Hz,1H,ArH),7.69(s,1H,ArH),7.89(s,1H,ArH),8.09(d,J＝8.90Hz,1H,ArH),8.30(d,J＝2.15Hz,1H,ArH),9.52(s,1H,CH＝N)；¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:26.87,45.36,49.14,56.46,56.49,56.81,102.19,108.83,112.40,119.70,119.73,123.58,127.14,129.85,131.87,132.11,140.10,146.00,147.11,150.92,154.39,163.64；HRMS(ESI):m/z計(jì)算值[M+H]⁺426.1584(C₂₃H₂₄ClN₃O₃),實(shí)驗(yàn)值426.1595。

效果驗(yàn)證實(shí)施例1：目標(biāo)化合物的體外抗腫瘤活性研究

采用MTT[3-(4,5)-雙甲基-2-噻唑-(2,5)-苯基溴化四氮唑藍(lán)]法來測定苯并啡啶類N-雜衍生物對人胃癌細(xì)胞(MGC-803)、人肺癌細(xì)胞(NCI-H460)、人肝癌細(xì)胞(HepG-2)、人肝癌細(xì)胞(BEL-7404)的半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。

(1)培養(yǎng)液(每升)的配制：①懸浮細(xì)胞：RPMI-1640培養(yǎng)粉一袋(10.4g)，新生牛血清100mL，青霉素溶液(20萬U/mL)0.5mL，鏈霉素溶液(20萬U/mL)0.5mL，加三蒸水溶解后，用5.6％的NaHCO₃溶液調(diào)pH值至7.2～7.4，最后定容至1000mL，過濾滅菌；②貼壁細(xì)胞：同上，再加入NaHCO₃ 2.00g，HEPES 2.38g。

(2)D-Hanks緩沖液(每升)的配制：NaCl 8.00g，KCl 0.40g，Na₂HPO₄·12H₂O 0.06g，KH₂PO₄ 0.06g，NaHCO₃ 0.35g，高壓滅菌。

(3)胰蛋白酶液的配制：利用D-Hanks緩沖液配成濃度為0.5％胰蛋白酶液，過濾除菌。

(4)實(shí)驗(yàn)藥液的配制：將測試樣品用少量的三蒸水溶解配成儲備液，一般按實(shí)驗(yàn)最高濃度的10倍配制儲備液.根據(jù)化合物溶解性不同，可用三蒸水直接溶解，或用少量DMSO助溶，再加三蒸水溶解；DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不宜過大，加藥后的每孔細(xì)胞懸液中DMSO的終濃度一般不超過0.05％-0.1％，儲備液保存于-20℃冰箱中備用。

(5)人腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)：為懸浮生長細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)于RPMI-1640培養(yǎng)液內(nèi)(含10％小牛血清、100U/mL鏈霉素)，置于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔3-4天傳代一次；傳代時將原瓶中培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000rpm離心5min，棄去原培養(yǎng)液，加入等量新鮮培養(yǎng)液，吹打均勻，移取適量至新鮮培養(yǎng)瓶中，再補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)液至原體積(培養(yǎng)液體積約為培養(yǎng)瓶容量的1/10)。

(6)細(xì)胞孵育：取對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，調(diào)細(xì)胞懸液濃度為1～1.5×10⁵個mL^-1；在96孔培養(yǎng)板中每孔加細(xì)胞懸液100μL，置37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，然后分別按設(shè)計(jì)加入藥液。

(7)加藥：將測試藥液按照最終濃度的濃度梯度分別加入到各個孔中，每個濃度設(shè)6個平行孔；實(shí)驗(yàn)分為藥物試驗(yàn)組(分別加入不同濃度的測試藥)、對照組(只加培養(yǎng)液和細(xì)胞，不加測試藥)和空白組(只加培養(yǎng)液，不加細(xì)胞和測試藥)；將加藥后的96孔板置于37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h；陽性對照藥物的活性按照測試樣品的方法測定。

(8)存活細(xì)胞的測定：在培養(yǎng)了48h后的96孔板中，每孔加MTT 40μL(用D-Hanks緩沖液配成4mg/mL)；在37℃放置4h后，移去上清液；每孔加150μLDMSO，振蕩5min，使formazan結(jié)晶溶解；最后，利用自動酶標(biāo)儀在490nm波長處檢測各孔的光密度(OD值)。

抑制率的計(jì)算：細(xì)胞生長的抑制率按照下列公式計(jì)算：

生長抑制率＝(1-存活率)×100％＝[1-(OD_{實(shí)驗(yàn)}-OD_空白)/(OD_對照-OD_空白)]×100％(OD_{實(shí)驗(yàn)}表示測試藥物組的平均光密度，OD_對照表示對照組的平均光密度，OD_空白表示對照組的平均光密度)。

半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)定義為當(dāng)50％的腫瘤細(xì)胞存活時的藥物濃度；根據(jù)測定的光密度(OD值)，制作細(xì)胞生長抑制率的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其對應(yīng)的藥物濃度。

以喜樹堿為陽性對照，測得的IC₅₀見表1所示。

表1本發(fā)明所列二苯并萘啶酮類化合物對腫瘤細(xì)胞的抑制IC₅₀值(μmol/L)

在化合物的抗腫瘤活性測試部分，利用MTT法測試了目標(biāo)化合物對MGC-803(人胃癌細(xì)胞)、NCI-H460(人肺癌細(xì)胞)、HepG-2(人肝癌細(xì)胞)以及7404(人肝癌細(xì)胞)的體外抗腫瘤活性，結(jié)果顯示所合成的目標(biāo)化合物對這四種腫瘤細(xì)胞均具有很好的抑制活性，其中，化合物H6對腫瘤細(xì)胞系NCI-H460、BEL-7404和HepG-2具有最高的抑制活性，IC₅₀值分別為0.477、0.577和0.022μmol/L，而化合物H7對腫瘤細(xì)胞系MGC-803具有最高的抑制活性，IC₅₀值為1.547μmol/L。